С горечью: Недопустимое название — Викисловарь

Содержание

Укрощение кукурбитацина, или как я боролся с горечью огурцов

Укрощение кукурбитацина, или как я боролся с горечью огурцов

Несколько недель назад заметил на одном из своих огуречных кустов «толстокожие» плоды. «Будут невкусные», — подумал я. Но такого поворота событий я не ожидал. 

Дни стояли тёплые, поэтому первых огурчиков с моей «Лианочки» (так любя я их называю) долго ждать не пришлось.

С гордостью снял первые огурцы. Это растение до этого ещё не плодоносило, хотя соседние кусты, правда, другого сорта, давно радуют нас.

Но какого было мое разочарование, когда во рту я почувствовал горечь. Причём горчила не только «попка», но и весь огурец!

«Мало поливаю»,- подумал я. Плоды на этой пазухе горчат, может с остальными такого не будет, надеялся я.


Мой куст с горькими огурцами

Огурчики у меня партенокарпические. Под кустами толстый слой мульчи, поэтому поливать приходится не часто. Максимум раз в 3-5 дней выливаю по 10 л воды под куст.

Сделав несложный расчёт, решил увеличить объём вносимой жидкости.

Если одна лиана за день потребляет 3 л воды (а дни стояли жаркие), то на 5 дней ей необходимо 15 л воды. Начал проливать под растения 1,5 лейки каждые несколько дней.

Но ситуацию это не спасло. «Срежь и выбрось»,- твердили домашние. «Щас»,- сказал я. 

Я корпел над ними несколько месяцев, с бубном только не плясал, а они выбрось. «Петунии свои срежь»,- подумал я про себя.

Homo sapiens sapiens включил мозги. Методом исключения начал искать причины горечи. Учитывая, что некоторые познания в области биологии всё же имеются, понимал – моя «Лианочка» подвержена стрессу.

— Поливал холодной водой? Нет, никогда. В теплице вода нагревается до комфортной для рук температуры. (Для полива огурцов так и должно быть)

— Недокормил? Не может быть. Регулярно вносил  то зелёное удобрение, то микроэлементы (настой луковой шелухи), кальций, лимонную кислоту (для лучшего усвоения питательных элементов) и т.п. Всё это было. Да и земля у нас хорошая.

— Перепады температур? Вот оно что! Днём жара, ночью прохладно. Да и несколько ночей температура опускалась до 6 С. Ни это ли стресс…

Казалось бы, причина раскрыта. Но вот незадача, почему другие растения, растущие бок о бок с этим, не горчат?

Знаете, проштудировав массу информации, наконец, сделал для себя вывод:

Горечь огурцов в большинстве случаев связана с сортовыми особенностями, а стресс уже играет вторичную роль.


Мне просто попался такой сорт

В природе все дикорастущие огурцы горькие. Это своеобразный защитный механизм. Растению необходимо оставить потомство, а горечь плодов позволяет сохранить хотя бы часть из них нетронутыми животными.

Оказалось, виновник того, что мои труды пошли насмарку, «зверь» по имени Кукурбитацин.

Больше всего этого вещества накапливается в кожуре. Возможно, поэтому они мне и показались некрасивыми.

Что я решил сделать с кустом с горькими огурцами?

Способность накапливать кукурбитацин передалось всем ныне растущим огурцам от далёких предков. А против генов, как мы все знаем, не попрешь!

Заставить лиану давать сладкие плоды уже не получиться. Но! Можно уменьшить эту горечь, что я и сделал.

В данный момент замачиваю их на сутки в холодной воде. В моём случае на качестве плодов это никак не сказывается, а горечи становится заметно меньше.

Плюс нельзя забывать, что максимальная концентрация кукурбитацина накапливается в кожице. Поэтому я её чищу.


Как я узнал недавно, кукурбитацин очень полезен для здоровья.
Он обладает желчегонным эффектом и борется с образованием клеток,
от названия которых всех нас бросает в дрожь.

Китайцы-то вообще специально выращивают такие огурцы. Ну, они люди привычные есть всякую дрянь, скажете вы. Мы тоже не отстаём! Некоторые сорта салатов и руколы тоже горчат мама не горюй, а многие их любят.

Я чищу свои огурцы и ем с мясом. Домашние такие огурцы употреблять отказались, поэтому планирую закатать салаты и посолить. Хотя существует мнение, что горькие огурцы лопаются и не пригодны даже для засолки. Буду проверять!

Решил подкормить растения по рецептам «для сладости огурцов». Может они смогут хотя бы чуточку уменьшить горечь. Буду экспериментировать и делиться с вами.

А если вам интересен мой опыт, и вы хотите узнать результаты моих экспериментов, ставьте лайк и подписывайтесь на наш канал. Продолжение следует!

коммунисты с горечью, пенсионеры с ностальгией (ВИДЕОБЛИЦ) – Новости Владивостока на VL.ru

Штурм Белого дома в Москве для разгона парламента, известный также как «Октябрьский путч», вспомнили в субботу, 3 октября, во Владивостоке. На центральной площади коммунисты помянули события 1993 года траурным пикетом. А прохожие ностальгировали о хорошей жизни тогда и уповали на веселую сейчас.

Сторонники КПРФ провели одиночные пикеты у памятника Борцам за власть Советов. Сменяя друг друга, они напомнили о 22-й годовщине обстрела Белого дома в Москве. Лозунг «Целились в социализм, а попали в Россию» стал основным на акции. Вооруженный госпереворот с 3 на 4 октября 1993 года организаторы обозначили как «дату гибели СССР». В скорбный для себя день участники зажгли свечи и раздали прохожим агитлистовки с перечислением прелестей социализма и ужасов капитализма.

«Скорбный либеральный переворот уничтожил страну — позволил ее распродать. Страна из парламентской превратилась в президентскую республику. После этого парламент не смог помешать олигархам приватизировать госпредприятия, — рассказал корреспонденту VL.ru участник акции депутат Заксобрания края Артем Самсонов. — Хотим, чтобы люди помнили свою историю и не допускали повторения этого. Понимали, что на президенте страны огромная ответственность. А то у наших граждан возник стереотип, что президент не виноват в произволе на местах. Но именно он выстроил эту вертикаль власти, а значит несет ответственность».

Краевые власти отказались согласовать проведение протеста на площади под предлогом выступления музыкантов, признались пикетирующие, однако коммунисты не пошли на попятную и решили провести памятную акцию в формате не требующих разрешения одиночных пикетов.

Напомним, разгон Съезда народных депутатов и Верховного Совета РФ — последствие конституционного кризиса 1992 года в России. Возникшие разногласия переросли в вооруженное противостояние двух политических сил — сторонников президента РФ Бориса Ельцина и основной части правящих тогда элит. Поводом послужил фактически упраздняющий Совет указ президента «О поэтапной конституционной реформе». В ответ сторонники отмененного органа попытались захватить здание мэрии и Останкино. 4 октября 1993 по решению Ельцина начался штурм Белого Дома с обстрелом из танков. В ходе столкновений 157 человек были убиты, 384 – ранены.

Мероприятие по соседству с главной городской ярмаркой собрало целевую аудиторию — пенсионеры и бывшие пионеры смотрели на пикетчиков с пониманием. В беседе со съемочной группой VL.ru они назвали распад Советского Союза грустной датой, якобы жили раньше проще и богаче. А в нынешнем режиме, пожалуй, могут гордиться только президентом. «Лидер», «настоящий мужик» — такими определениями наградили респонденты Владимира Путина.

Представители подрастающего поколения знают о СССР из уроков истории немного, поэтому нынешнему времени рады больше. Сошлись респонденты разных возрастов в одном — жить нынче стало веселее. Впрочем, смотрите сами.

ВИДЕОБЛИЦ:

Как справиться с горечью, если слишком много сахара — Жизнь. Продолжение следует — Русфонд

27.02.2015

Жизнь. Продолжение следует

Как справиться с горечью, если слишком много сахара

Рубрику ведет Сергей Мостовщиков

Он оказался серьезный человек, этот Эдуард Ахметов из Уфы. На прощание даже подарил мне красную коробку из-под жвачки Hubba Bubba. Говорил строго. На, сказал, держи, там вообще-то полная коробка невидимых моллюсков, гляди не потеряй. Парень что надо, честное слово. На мелочи не разменивается – при мне сказал матери, что вырастет и купит ей и отцу два дома.

– Недавно же обещал только один, – вспомнила мать.

– Будет два, – махнул рукой. – И не дома, а замка. Так даже лучше.

Когда пили чай, Эдуард решил съесть шоколадную конфету. Сам себе сделал анализ крови. Сам ввел нужные данные в компьютер, управляющий инсулиновой помпой, деньги на которую специально для Эдуарда

собрал Русфонд. Взъерошил волосы, вздохнул, но как-то философски, без досады:

– Эх, добьет меня когда-нибудь этот сахар.

Развернул конфету и съел. Серьезный такой мужчина. Семь лет. С четырех болеет сахарным диабетом. Такая с ним история. Вот как ее рассказывает Резеда, мать взрослого человека Эдуарда Ахметова.

«Город наш, Уфа – лучший город на земле. Зеленый, добрый. Люди у нас неозлобленные, нехапкие, что ли, как это бывает в других местах. Родилась я и выросла в небольшой семье. Брат, мама, бабушка, папа. Когда родители развелись, переехали сюда, к бабушке, к маминой маме, с тех пор так тут и живем. С мужем познакомились в аське, есть такой компьютерный чат. Он прислал мне анекдот, я прислала ему анекдот, пообщались, встретились и поженились. А что это были за анекдоты, я теперь даже и не помню. По-моему, про милицию.

Поженились, родили двоих детей, Эдика и Самиру. Дочка чуть помладше. Эдик рос у меня помощником, с самого детства был такой он, взрослый мальчик. Мужчина. Он иногда, конечно, что-нибудь скажет невпопад, но всегда защищает нас. Он у нас защитник. И помощник. Дочь у меня росла беспокойная, а мне надо было готовить, убираться, так мне всегда сын помогал. В три года начал сам буквы учить, сам стал читать. Мы ему даже сказали: «Научишься книжки читать, подарим тебе планшетник». За неделю до пятилетнего дня рождения он пришел ко мне с книгой, раскрыл ее и прочитал.

А с болезнью вот как вышло. Ему было три года, шел четвертый, и вот в конце декабря мы заметили, что он какой-то вялый стал. Был активный парень, а тут начал больше лежать. Никогда не писался, и вдруг десятого февраля это произошло. Мы пошли в больницу, сдали анализ крови. Вроде, все нормально оказалось с сахаром. На следующий день опять все повторилось. В конце концов, я отвезла его в платную клинику, сделали анализ там, выяснилось, что все очень плохо. «Скорую» вызывать не стали, повезли его на машине в республиканскую больницу. Там нас госпитализировали, начали сразу колоть инсулин. Начался у нас диабет.

Три года мы болеем, особенных осложнений не было. А сейчас начались проблемы, все время сахар у нас разный: то низкий, то высокий. Это влияет на сосуды, так что в этом году он у нас стал падать в обмороки. Ну, то есть он как бы засыпает. Может читать и заснуть. Сесть и заснуть. Начались проблемы со зрением. Но благодаря тому, что Русфонд собрал нам деньги на инсулиновую помпу, мы почувствовали огромное облегчение. Потому что представьте: колоться минимум десять раз в сутки либо раз в три дня – большая разница. Он лучше стал себя чувствовать, реже сахар в крови становится слишком низким или слишком высоким. То есть появилась такая вот стабильность.

Конечно, грех особенно жаловаться – нам еще повезло. Есть дети, которые живут не то что на постоянных уколах, а на капельницах. Наши проблемы кажутся решаемыми. Только бы было терпение. Хватает, конечно, его не всегда. Например, тут нам летом соцзащита выделила путевки в санаторий “Виктория” в Ессентуках. Это целая история. Еле добрались на поезде, страшная жара, инсулин хранить негде, пришлось купить холодильник. Приехали туда, пришли в столовую, официантка швырнула холодную кашу на стол, ребенка всего обдало аж с ног до головы. Мы перепугались, ели сначала в кафе в городе, а через два дня обменяли билеты и уехали обратно.

Хорошо, что у нас тут к детям относятся более трепетно. Вот у нас есть школа, куда сын скоро пойдет. Там знакомы с проблемой диабета, у них есть опыт. И у педагогов, и у медиков. Нам там очень рады, тем более что он уже и читает, и пишет, подготовленный. Меня, конечно, волнует, как он там адаптируется к детям. С тех пор, как он заболел, выходить нам на улицу было довольно сложно. Постоянно с глюкометром. Сильно бегать нельзя, потому что сахар упадет. Дети грызут конфеты, а ему нельзя – сахар поднимется. То есть он давно уже во всем ограничен, с детьми общался только в больницах. Как это скажется в школе – посмотрим.

Но в любом случае – все это жизнь. А когда-то мне казалось, что все оборвалось в одну секунду, все закончилось. Закончилось навсегда, без каких-либо шансов. Мы же надеялись, как и все. Пытались обращаться к нетрадиционной медицине, я сама покупала какие-то травы, слушала соседей, которые говорили, что можно вылечить диабет. Понятно, что все это не так. Тем не менее плакать все время тоже невозможно. Так что я для себя решила: если я себя сейчас, так скажем, убью своими эмоциями, кому он будет нужен, сын мой? Кто его на ноги поставит? Муж, конечно, не бросит его, он его любит. Но все-таки каждому ребенку нужна мама. Вот я она и есть».

Фото Сергея Мостовщикова

Король и Шут — Помнят с горечью древляне (Повелитель мух), аккорды для гитары

Intro: Bm | Bm | A | A7

     G
Помнят с горечью древляне,
         Em
Хоть прошло немало лет,
    C
О романтике Демьяне,
      D
Чей лежит в лесу скелет.
     G
Жаль, никто ему не верил,
         Em
Но захватывало дух
    C
От его былин о фее -
      D
Повелительнице мух.

       B7                     Am
К этой фее был романтик полон страсти и любви,
        G           C           Em
Чувства ей хотел он выразить свои!
        D           C Bm      D
Чувства выразить свои! Хе-е-ей!

     G
В час, когда он видел фею,
         Em
Начинал ей повторять:
    C
"Жизнь свою не пожалею
      D
За твою любовь отдать!"
     G
Все застыли в изумлении,
         Em
Лишь народ о том узнал,
    C
Что Демьян по воле феи
      D
Поклоняться мухам стал!

       B7                     Am
К этой фее был романтик полон страсти и любви,
        G           C           Em
Чувства ей хотел он выразить свои!
        D           C D
Чувства выразить свои!

         G        C          Em
Романтик идола во мраке сотворил,
       D           C  Bm     D
Ему он жертвы приносил! Э-ге-гей!

Соло: x2 G | Em | C  | D (Автор подбора соло: Vanya_1)
e--------------------------------------------------------------------|
b--------------------------------------------------------------------|
g--------------------------------------------------------------------|
d-----14-12-14-16-14-12--11-12-11--9-11-12---------------------------|
a-9-11-------------------------------------9--9-12-12-10-12-14-12-10-|
e--------------------------------------------------------------------|

e--------------------|
b--------------------|
g---------9-11-12-14-|
d-9-12-12------------|
a--------------------|
E--------------------|
e--------------------|

Проигрыш: G | Em | C | D }x2 
          B7 | Am D

          G          C            Em
Эй, люди, мухам поклоняться нужно нам,
      D          C  D
А не языческим богам!
           G            C       Em
Я, братцы, до того, как фею полюбил,
         D           C   D
По сути, безнадежным был!

        G          C   Em
Не знал романтик, что она
       D          C   D
Для любви не рождена.
        G      C      Em
И не безгрешен сам он был,
        D            C  D
Он тоже мух когда-то бил.
       G         C             Em
Летели мухи на него со всех сторон,
        D            C
Был ритуально скушан он...

О музее — Спасское-Лутовиново

Государственный мемориальный и природный музей–заповедник И. С. Тургенева «Спасское-Лутовиново» — уникальный памятник культуры, единственный в России мемориальный музей великого русского писателя.

«Рудин», «Дворянское гнездо», «Фауст», «Отцы и дети», «Накануне», «Призраки», «Новь», «Песнь торжествующей любви», стихотворения в прозе – вот далеко не полный перечень тургеневских произведений, история создания которых связана со Спасским-Лутовиновым – родовым имением матери писателя во Мценском уезде Орловской губернии.

Музей писателя в Спасском хранит память о многих замечательных людях: гостями Тургенева были Л.Н. Толстой, Н.А. Некрасов, А.А. Фет, М.С. Щепкин, Я.П. Полонский, Д.В. Григорович, М.Г. Савина, Н.В. Успенский, В.М. Гаршин и другие виднейшие представители русской культуры.

Музей-заповедник «Спасское-Лутовиново» — это одна из немногих сохранившихся в России усадеб-памятников; это с огромным трудом сохраненное нашими предками «тургеневское» пространство.

Судьба тургеневского родового гнезда после смерти великого писателя складывалась драматически. Сама усадьба и прилегающие к ней земли были сданы в аренду. Не ремонтировался и не отапливался опустевший дом, разрушались хозяйственные постройки. Тургеневские рукописи и документы, фамильные портреты и семейные реликвии разошлись по наследникам. Многое исчезло безвозвратно. В январе 1906 года тургеневский дом был уничтожен пожаром. Лишь благодаря предусмотрительности новых хозяев — О. В. и Н. П. Галаховых, заблаговременно были вывезены и в основном сохранены спасская библиотека и мебель. Дореволюционный губернский музей, номинально опекавший усадьбу, оказался бессильным остановить процесс ее запустения.
С горечью писали журналисты тех лет об угасании тургеневского родового гнезда: «Парк обратился в сплошной лес, заросший кустами орешника, крапивой и бурьяном. Дом сгорел, на его месте поднимаются из-за бурьяна почерневшие остатки стен и груды кирпича. От бывших хозяйственных построек в большинстве и следа не осталось. Аллеи заросли травой, на большом протяжении парк превратился в густо заросшую чащу; кусты беспорядочно разрослись и перемешались с крапивой и репейником. Получилась полная картина запустения».

На протяжении ряда лет поместье Тургенева сдавалось в аренду — сначала частным лицам, позднее — сельхозартели, совхозу и местной школе. Тургеневский парк одичал, сильно пострадал от вырубок. Оставшиеся строения ветшали, подвергались расхищению, некоторые из них были полностью разобраны. Зарастали усадебный парк и пруды, в худшую сторону менялся пейзаж.

В 1918 году постановлением Орловского губисполкома Спасская усадьба была объявлена национальным достоянием и перешла в ведение и управление губернского земельного отдела. В том же году состоялось открытие музея И. С. Тургенева в Орле. Для этой цели был национализирован дом Галаховых. Сохранившиеся тургеневские книги, мебель, рукописи, личные вещи были объявлены национальной собственностью.

26 октября 1922 г. в «Известиях ВЦИК» была опубликована официальная информация об усадьбах классиков, объявленных неприкосновенными памятниками природы и культуры. Среди них – «имение И.С. Тургенева «Спасское-Лутовиново» Орловской губернии». Эту дату принято считать датой основания музея-заповедника И.С. Тургенева.

У истоков создания музея стояли А. В. Луначарский и В. Я. Брюсов. В становлении музея-усадьбы в разное время принимали участие А. М. Горький, К. А. Федин, И. А. Новиков. Первым хранителем стал известный ученый-литературовед М. В. Португалов. Уже в 1920-х годах начались подготовительные работы по восстановлению усадьбы. В 1929 году была создана специальная комиссия по сбору воспоминаний, выявлению у местных жителей вещей, принадлежавших ранее семье писателя. В этом же году музей открылся для посетителей.

В 1930 году был закрыт Храм Спаса Преображения. Колокольня была снесена, иконостас и церковная утварь разграблены. В 1941 г. в здании храма была развернута выставка «Жизнь и творчество Тургенева» (автор Б. А. Ермак). Впоследствии помещение церкви использовалось как склад для рабочего инвентаря, сена и яблок. В фамильном склепе было решено устроить силосную башню. Для нужд колхоза было вывезено строение богадельни.

В 1937 г. музей-усадьба «Спасское-Лутовиново» стал филиалом Орловского Государственного литературного музея И. С. Тургенева.

В 1939 г. в связи со 120-летием со дня рождения И. С. Тургенева музей был переведен в разряд государственных. В том же году были восстановлены флигель, богадельня и баня, конюшня и каретный сарай. Были собраны и изучены воспоминания современников И. С. Тургенева, зарисовки и фотографии усадьбы, свидетельства старожилов, произведены обмеры уцелевших строений и раскопки фундаментов разрушенных зданий, составлены проекты восстановления строений заповедника. Начались работы по расчистке парка.

Весной 1941 года были завезены материалы для восстановления главного усадебного дома. Работы прервала война. Около трёх месяцев тургеневская усадьба и село Спасское-Лутовиново были оккупированы фашистскими войсками, которые перед отступлением в декабре 1941 года сожгли село и усадебные строения — богадельню и церковную сторожку. В 1942 году заповедник оказался в прифронтовой полосе. В течение полутора лет на территории усадьбы располагались воинские части, в здании флигеля размещался медсанбат.

В годы войны сильно пострадали здания церкви, фамильного склепа Лутовиновых, каретного сарая и конюшни. Территория усадьбы была изрыта блиндажами, окопами, воронками от бомб и снарядов, пруд с прорванной плотиной пересох, аллеи парка завалены упавшими деревьями. Но уже 16 июня 1944 года тургеневский заповедник был вновь открыт для посетителей.

В послевоенные годы усилия сотрудников музея были сосредоточены, главным образом, на работах по восстановлению парка. Территория усадьбы была очищена от мин и снарядов, убраны погибшие деревья, засыпаны блиндажи и окопы; полностью возобновлена берёзовая аллея, ведущая к пруду, отремонтирована плотина Большого пруда.

В 1953 году во «флигеле изгнанника» была открыта первая стационарная литературная экспозиция «Тургенев и родина».

В 1968 году, в связи с 150–летием со дня рождения писателя, Министерство Культуры РСФСР приняло решение о восстановлении дома И. С. Тургенева. Летом 1976 года строительство было завершено. Подлинные вещи писателя, семейные реликвии и сохраненная мебель составили основу экспозиции дома-музея, которая была открыта для посетителей в сентябре 1976 года.

Постановлением Совета Министров РСФСР от 28 августа 1987 г. № 351 «в целях сохранения памятных мест, связанных с жизнью и творчеством И.С. Тургенева, улучшения использования его творческого наследия в патриотическом, нравственном и эстетическом воспитании трудящихся» на базе филиала Государственного литературного музея И. С. Тургенева в г. Орле был создан Государственный мемориальный и природный музей-заповедник И. С. Тургенева «Спасское-Лутовиново». Преобразование музея-усадьбы И. С. Тургенева «Спасское-Лутовиново» в Государственный мемориальный и природный музей-заповедник обозначило новый этап его развития.

С 1988 года возобновились работы по капитальному ремонту ландшафтных участков мемориального парка. Усилиями коллектива сотрудников за последние двадцать лет, в результате кропотливой исследовательской и реставрационной работы был возрожден неповторимый в своей красоте архитектурно-парковый усадебный комплекс конца XVIII — начала XIX веков.

Музей-заповедник «Спасское-Лутовиново» — это не только мемориал великого русского писателя, не только память о людях и событиях, так или иначе прикоснувшихся к Спасскому за всю его многовековую историю, это одна из немногих сохранившихся в России усадеб-памятников, это с огромным трудом сохраненное нашими предками тургеневское пространство.

По своему значению музей-заповедник И. С. Тургенева «Спасское–Лутовиново» — один из крупнейших литературных мемориальных комплексов России. Ежегодно музей заповедник принимает около 120 тысяч посетителей.

Указом Президента Российской Федерации № 275 от 2 апреля 1997 года Государственный мемориальный и природный музей-заповедник И. С. Тургенева «Спасское-Лутовиново» включен в перечень особо ценных объектов культурного наследия народов Российской Федерации.

определение слова горько в The Free Dictionary

Не желая терять свои лещины и все же не в силах убрать руку, он разрыдался и горько сетовал на свое разочарование. «И если бы я мог получить свое, — возразил Язычник в Своей Слепоте, горько злобно, но елейно учтиво, — я бы Выдуйте всех своих из вселенной. «Сейчас так бы говорили все, — с горечью подумал я. Я ответил, что бабушка писала мне, как Антония уехала замуж за Ларри Донована в какое-то место, где он работал; что он бросил ее, и что теперь есть ребенок.Пока она говорила, лягушка высунула голову из воды и сказала: «Принцесса, почему ты так горько плачешь?» ‘Увы!’ — спросила она. — Что ты можешь сделать для меня, противная ты лягушка? Он был их мальчишкой, и теперь они с горечью вспомнили свой страх, что он попытается получить стипендию в одной из больших государственных школ и таким образом вылетит из их школы. руки. Тогда бедная принцесса горько заплакала, но это было бесполезно; ее муж не вернулся. — А пока, — с горечью возразил Томсон, — оставьте ему полную свободу действий, чтобы делать все, что он может.»Я должен был говорить о нем более осторожно,» сказал я с горечью. «Я должен был помнить, что женщина может простить почти любую обиду, которую может причинить ей мужчина, — если это мужчина, которого она любит». В тот день мы работали с тяжелым сердцем; девочки большую часть времени горько плакали, а мы, мальчики, вызывающе насвистывали. Он горько сожалел о ложной гордыне, которая привела его друга к поведению, столь мало достойному любви, которая их объединяла. горькое пренебрежение ее образованием, которое она представляет, однако, как совершенно неизбежное, что я вынужден вспомнить, сколько весен подряд ее светлость провела в городе, в то время как ее дочь была оставлена ​​​​в Стаффордшире на попечение слуг или гувернантки немногим лучше , чтобы я не поверил тому, что она говорит.Они собрались вокруг призрака сына Пелея, и призрак Агамемнона присоединился к ним, горько скорбя. Вокруг него собрались также призраки тех, кто погиб вместе с ним в доме Эгисфа; и призрак Ахиллеса заговорил первым.

На резко разделенных выборах в Саутлейке, штат Техас, противники антирасистского образования побеждают. оглушительная победа в субботу для списка школьной доски и кандидатов в городской совет, которые выступили против плана.

В ходе необычайно ожесточенной кампании, которая отразила растущий национальный раскол по поводу того, как решать вопросы расы, пола и сексуальности в школах, кандидаты в городе Саутлейк разделились на два лагеря: те, кто поддерживал новые требования разнообразия и включения в обучение для Кэрролла. студенты и учителя, а также те, кого поддержал комитет политических действий, который был сформирован в прошлом году, чтобы сорвать этот план.

ПОСЛУШАЙТЕ: «Саутлейк», новый подкаст от NBC News

С одной стороны, сторонники прогресса утверждали, что необходимы изменения в учебной программе и дисциплине, чтобы все дети чувствовали себя в безопасности и были желанными гостями в Кэрролле, в основном белом, но быстро расширяющемся школьный округ.С другой стороны, консерваторы в Саутлейке отвергли план школьного разнообразия как попытку внушить учащимся крайне левую идеологию, которая, по мнению некоторых, узаконит дискриминацию белых детей и детей с консервативными христианскими ценностями.

Кандидаты и избиратели с обеих сторон описали выборы как «развилку на дороге» для Саутлейка, богатого пригорода в 30 милях к северо-западу от Далласа. «Так же, как и в Саутлейке, — предупредил местный консервативный обозреватель за несколько недель до выборов, — так же, как и в остальной Америке.

В конце концов, конкуренция не была закрытой. Кандидаты, поддержанные консервативной организацией Southlake Families PAC, которая с прошлого лета собрала более 200 000 долларов, выиграли каждую гонку примерно с 70 до 30 процентов, в том числе за два места в школьном совете. , два места в городском совете и мэр.Более 9000 избирателей проголосовали, в три раза больше, чем в аналогичных конкурсах в прошлом.

Выборы в Саутлейке, штат Техас, прошли в субботу с необычно высокой явкой, так как борьба за школьный план разнообразия разделила городок.Ниташия Джонсон / для NBC News

Ханна Смит, известный юрист из Саутлейка, которая работала клерком у судей Верховного суда Кларенса Томаса и Сэмюэля Алито, победила Эда Эрнандеса, бизнес-консультанта, и получила место в школьном совете Кэрролла. В заявлении для NBC News в воскресенье белый Смит сказал, что выборы «были референдумом о тех, кто ставит личную политику и вызывающие разногласия философии выше студентов и семей Кэрролла ISD, а также их общего американского наследия и техасских ценностей».

«Рекордное количество избирателей собралось вместе, чтобы восстановить единство», — сказал Смит.«Подавляющим большинством голосов они не хотят, чтобы расовая критическая теория расы преподавалась их детям или навязывалась их учителям. Избиратели согласились с моим позитивным видением нашего сообщества и его будущего».

Эрнандес и другие кандидаты, баллотирующиеся в поддержку новых программ разнообразия и инклюзивности, заявили, что не были особенно удивлены результатами в исторически консервативном городе, где около двух третей избирателей поддержали президента Дональда Трампа в прошлом году, но были встревожены перевесом своего поражения.

Кандидат в школьный совет Эд Эрнандес обнимает свою жену Дженнифер, узнав о своем поражении на муниципальных выборах в Саутлейке в субботу. Ниташия Джонсон / для NBC News

Эрнандес, иммигрант из Мексики, сказал, что он обеспокоен сигналом, который результат посылает десяткам старшеклассников Кэрролла и недавним выпускникам, которые рассказали истории о расистских и анти-гей-издевательствах за последние два года. . Чтобы продемонстрировать необходимость перемен, члены возглавляемой студентами Саутлейкской антирасистской коалиции в прошлом году собрали более 300 сообщений от нынешних и бывших студентов Кэрролла, которые заявили, что с ними жестоко обращались из-за их расы, религии или сексуальной ориентации.

«Я не хочу думать обо всех этих детях, которые поделились своими историями, своими свидетельствами», — сказал Эрнандес, чувствуя себя сильнее в субботу после того, как узнал о результатах выборов. «Я не хочу думать об этом прямо сейчас, потому что это очень, очень тяжело для меня. Мне очень жаль всех этих детей, каждого из них, которые поделились своей историей. У меня нет для них слов. .»

Драка в Саутлейке началась осенью 2018 года, когда видео белых старшеклассников Кэрролла, скандирующих слово на букву «Н», стало вирусным и попало в заголовки национальных газет.После этого руководители школ провели сеансы прослушивания с учащимися и родителями и назначили комитет из 63 добровольцев из сообщества, чтобы разработать план, как сделать Кэрролл более гостеприимным для учащихся из разных слоев общества.

Усилие было, в частности, признанием меняющейся демографии. Население Саутлейка за последние три десятилетия утроилось и превысило 31 000 человек, отчасти благодаря иммигрантам из Южной Азии, привлеченным в этот район высокооплачиваемой работой и высококлассными школами.Чернокожие жители составляют менее 2 процентов населения в городе, где средний доход домохозяйства составляет более 230 000 долларов США, а 74 процента жителей — белые.

Результат работы школьного комитета по разнообразию — 34-страничный документ под названием «План действий по повышению культурной компетентности» — был обнародован прошлым летом, в разгар пандемии, жарких президентских выборов и более широкой общенациональной расплаты за расизм после убийства Джордж Флойд от белого полицейского в Миннеаполисе.

План предусматривал обязательный тренинг по учету культурных особенностей для всех учащихся и учителей Кэрролла, официальный процесс сообщения и отслеживания случаев расистского издевательства и изменения в кодексе поведения для привлечения учащихся к ответственности за акты дискриминации. В предложении также предлагалось создать должность директора по вопросам справедливости и привлечь внимание к усилиям округа.

План был встречен быстрым и яростным сопротивлением. В течение нескольких месяцев консервативные родители собирали собрания школьного совета, осуждая аспекты предложения, которое, по их словам, могло бы создать «полицию разнообразия» и равносильно «обратному расизму».» Члены ПКС Southlake Families, который был сформирован через несколько дней после обнародования плана, особо не согласились с предложением округа отслеживать случаи микроагрессии — малозаметных, косвенных и иногда непреднамеренных случаев дискриминации. , белый отец сказал, что он поддерживает знакомство детей с разными культурами, но утверждал, что план округа вместо этого научит учеников «быть жертвой» и заставит их принять «либеральную идеологию».Несколько родителей заявили, что этот план посягнет на их христианские ценности, обучая детей проблемам, затрагивающим одноклассников-геев и трансгендеров. Другие предупредили, что правление пробудило «молчаливое большинство» Саутлейка. Декабрь выиграл временный запретительный судебный приказ, который приостановил реализацию плана разнообразия Затем, в прошлом месяце, два члена школьного совета, которые поддержали план, были обвинены большим жюри округа Таррант в нарушении закона Техаса об открытых собраниях. , проступок, после того, как противники плана разнообразия получили тексты, показывающие, что участники обменивались сообщениями друг с другом, прежде чем они проголосовали за него.

Этот вопрос стал определяющей темой типично скромных муниципальных выборов в Саутлейке этой весной, разделивших соседей и бывших друзей. Демократическая партия округа Таррант кратко разместила, а затем удалила изображение в социальных сетях, назвав всех кандидатов, выступавших против плана разнообразия, «расистскими». Тем временем Southlake Families PAC разослал почтовые рассылки, в которых обвинял кандидатов от плана, выступающего за разнообразие, в продвижении «радикального социализма» в Саутлейке.

В преддверии дня выборов город оказался в центре внимания всей страны, и на правых новостных сайтах появилось множество статей, описывающих конкурс как испытание для более масштабной общенациональной борьбы за антирасистские программы в школах.

«Это происходит повсюду», — сказал ведущий Fox News Такер Карлсон во вторник во время сегмента, посвященного плану разнообразия Кэрролла и полученному в результате ответному удару. «Они придут, разрушат вашу школу, навредят вашим детям, заберут ваши деньги, будут издеваться над вами, и никто ничего не сделает. родители, которые что-то делают».

Когда в субботу непрерывный поток избирателей из Саутлейка направился к ратуше, многие описали значение голосования.«Это отличный город», — крикнула женщина через плечо, отказавшись говорить с журналистами. «Я хочу, чтобы так и оставалось».

Джейсон Рудман, белый отец двоих детей, проголосовавший за консервативный список кандидатов, сказал, что разочарован политическим дискурсом в городе.

«Для меня важнее всего то, что у нас есть диалог», — сказал Рудман, чьи дети ходят в частную школу. «Я не чувствую, что сейчас мы находимся в том месте, где одна из сторон разговаривает с другой стороной. Я чувствую, что люди швыряют гранаты туда-сюда, и для меня это самая важная вещь, с которой нужно справиться. с.»

В отеле Cambria, где в субботу собрались кандидаты, выступающие за план разнообразия, и их сторонники, вскоре после 19:00 партия, выступающая за результаты выборов, помрачнела, когда новости об их результатах прокатились по комнате. В гонке на пост мэра победил консерватор Джон Хаффман. 71 процент голосов за победу над Деброй Эдмондсон.Хаффман, который критиковал план разнообразия во время работы в городском совете Саутлейка, не ответил на сообщение с просьбой прокомментировать.

Сторонники школьного совета Саутлейка и кандидаты в городской совет, которые выступали за школьное разнообразие План сделал последний толчок для голосования в субботу.Ниташия Джонсон / для NBC News

Дженнифер Хаф, белая мать двух студентов Кэрролла, которые выступали в поддержку предложения о разнообразии, сказала, что она рассержена и убита горем.

«Потому что ненависть побеждает», — сказал Хаф. «Как я уже сказал, мы разозлимся, а потом перегруппируемся и выясним, куда нам идти. Город меняется. В него переезжает все больше людей. Так что это не будет продолжаться вечно».

Тем временем студенты-члены Антирасистской коалиции Саутлейка, которая была организована в прошлом году, чтобы потребовать изменений в Кэрролле, заявили, что они расстроены результатами, но полны решимости продолжать настаивать на переменах.

«Я не удивлена, но я встревожена», — сказала Никки Олалей, темнокожая ученица 12-го класса старшей школы Кэрролла, которая открыто критиковала отношение школьной системы к расистским издевательствам и травле против геев. «Я не думаю, что пришло время устраивать вечеринку сожаления. Мы просто готовы продолжать двигаться вперед и делать все, что в наших силах, используя наши голоса».

Горький Определение и значение | Британский словарь

1 горький /ˈbɪtɚ/ имя прилагательное

Определение слова BITTER в Британском словаре

[более горький; самый горький]

◊ Форма горький почти никогда не используется для обозначения «более горький», но форма горький обычно используется для обозначения «наиболее горький».

: с сильным и часто неприятным вкусом, противоположным сладкому : вызывая болезненные эмоции
  • горькие разочарования

  • горький поражение

: ощущается или переживается сильным и неприятным образом

◊ Горькую пилюлю или проглотить горькую пилюлю трудно или больно принять.

: злой и несчастный из-за несправедливого обращения
  • Его предательство сделало ее горькой .

  • Она все еще была ожесточенной по отношению к своему бывшему мужу.

  • Он самый озлобленный человек, которого я знаю.

: чувство или проявление сильной ненависти или гнева
  • горькие враги

  • горький аргумент

  • a горький ответ

: очень холодно
  • а горький ветер

  • горький холодный

до/до победного конца

: до конца чего-то, что может быть очень плохим, неприятным и т. д.

— горечь

существительное [не в счет]

2 горький /ˈbɪtɚ/ существительное

множественное число горькие

множественное число горькие

Определение слова BITTER в Британском словаре

горькие [множественное число] : горькая алкогольная жидкость, которая используется особенно в смешанных напитках британский : сорт пива со слегка горьковатым привкусом

[не в счет]

[считать]

Биологически активные добавки для похудения

Биологически активные добавки для похудения

Растопить жир.Похудеть естественно. Заманчивые претензии, но доставляют ли продукты?

Персонал клиники Майо

Трудно устоять перед обещанием быстрой потери веса. Но облегчают ли добавки для похудения что-либо, кроме вашего кошелька? И они безопасны?

Что такое пищевые добавки?

Пищевые добавки продаются как вспомогательные средства для здоровья. Их принимают через рот. Обычными ингредиентами являются витамины, минералы, клетчатка, кофеин, травы и другие растения.

Некоторые из самых популярных пищевых добавок утверждают, что улучшают питание, повышают энергию, наращивают мышечную массу или сжигают жир.

Биологически активные добавки не являются лекарственными средствами. Они не предназначены для лечения или лечения болезней.

Как регулируются пищевые добавки?

Компании, производящие добавки, несут ответственность за безопасность своей продукции. Они должны гарантировать, что их продукты не содержат загрязняющих веществ и что они имеют точную маркировку.

Пищевые добавки не требуют одобрения Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA). Но если добавка окажется небезопасной, FDA может выдать предупреждение или потребовать изъять ее с рынка.

FDA также может принимать меры против компаний, которые делают ложные или необоснованные заявления о продаже своих пищевых добавок.

Интерпретация заявлений о потере веса

Возможно, вы удивитесь, узнав, что производители пищевых добавок редко проводят клинические испытания. Это одна из причин, по которой существует мало научных доказательств того, что добавки для похудения работают.

Например, кетон малины позиционируется как клинически проверенный продукт для похудения.Это утверждение подтверждается одним клиническим испытанием.

В исследование были включены 70 взрослых с ожирением. Все они были помещены на ограниченную диету и программу упражнений. Затем им случайным образом назначали либо плацебо, либо добавку, содержащую кетон малины, кофеин, экстракт горького апельсина, имбиря и корня чеснока.

45 человек, завершивших испытание, потеряли вес:

  • Средняя потеря веса в группе, принимавшей добавки, составила 4,2 фунта (1,9 кг).
  • Средняя потеря веса в группе плацебо составила 0.9 фунтов (0,4 кг).

Хотя эти результаты интригуют, тот факт, что испытание было небольшим и длилось всего восемь недель, означает, что результаты нельзя надежно обобщить на реальные ситуации. И что важно, такое короткое испытание может пропустить побочные эффекты, которые проявляются только при длительном использовании.

Кроме того, в исследовании использовалась добавка, содержащая несколько ингредиентов. Поэтому невозможно сказать, какой ингредиент был ответственен за потерю веса.

В идеале эти первоначальные результаты должны быть проверены в гораздо более длительном испытании с участием сотен участников с тщательным мониторингом побочных эффектов. Результаты такого испытания позволят принять информированное решение о безопасности и эффективности такого продукта.

До тех пор, пока такие данные испытаний не станут более доступными, к заявлениям о пищевых добавках и потере веса следует относиться с осторожностью.

Понимание вопросов безопасности

Продукт не обязательно безопасен только потому, что он натуральный.Хотя и редко, некоторые пищевые добавки связаны с серьезными проблемами, такими как повреждение печени.

Добавки могут иметь сильные эффекты. Эфедра (ма-хуанг) — это трава, которая когда-то использовалась для похудения. В настоящее время он запрещен FDA , потому что он был связан с побочными эффектами, такими как изменения настроения, высокое кровяное давление, нерегулярный сердечный ритм, инсульт, судороги и сердечные приступы.

Было обнаружено, что некоторые добавки для похудения содержат скрытые ингредиенты, такие как отпускаемые по рецепту лекарства, которые могут быть вредными.

Узнайте перед покупкой

Если вы думаете о том, чтобы попробовать добавку для похудения, важно сделать домашнее задание. Проверьте заслуживающие доверия веб-сайты, например, принадлежащие Управлению диетических добавок США и Национальному центру комплементарного и интегративного здоровья.

Также обязательно поговорите со своим врачом, прежде чем принимать какие-либо добавки. Это особенно важно, если у вас проблемы со здоровьем, вы принимаете лекарства, отпускаемые по рецепту, беременны или кормите грудью.

Получите самую свежую медицинскую информацию от экспертов Mayo Clinic.

Зарегистрируйтесь бесплатно и будьте в курсе последних научных достижений, советов по здоровью и актуальных тем, связанных со здоровьем, таких как COVID-19, а также экспертных знаний по управлению здоровьем.

Узнайте больше об использовании данных Mayo Clinic.

Чтобы предоставить вам наиболее актуальную и полезную информацию, а также понять, какие информация полезна, мы можем объединить вашу электронную почту и информацию об использовании веб-сайта с другая информация о вас, которой мы располагаем. Если вы пациент клиники Майо, это может включать защищенную информацию о здоровье. Если мы объединим эту информацию с вашей защищенной медицинской информации, мы будем рассматривать всю эту информацию как информацию и будет использовать или раскрывать эту информацию только так, как указано в нашем уведомлении о практики конфиденциальности.Вы можете отказаться от получения сообщений по электронной почте в любое время, нажав на ссылка для отписки в письме.

Подписывайся!

Спасибо за подписку

Наш электронный информационный бюллетень Housecall будет держать вас в курсе последней медицинской информации.

Извините, что-то пошло не так с вашей подпиской

Повторите попытку через пару минут

Повторить попытку

01 марта 2022 г. Показать ссылки
  1. Биологически активные добавки для похудения.Управление пищевых добавок. https://ods.od.nih.gov/factsheets/WeightLoss-HealthProfessional/. По состоянию на 26 октября 2020 г.
  2. Perreault L. Ожирение у взрослых: медикаментозная терапия. https://www.uptodate.com/contents/search. По состоянию на 26 октября 2020 г.
  3. Биологически активные добавки. Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США. https://www.fda.gov/consumers/consumer-updates/dietary-supplements. По состоянию на 26 октября 2020 г.
  4. Барреа Л. и др. Диетолог и ожирение: краткий обзор эффективности, безопасности и лекарственных взаимодействий основных пищевых добавок для похудения.Международный журнал добавок для борьбы с ожирением. 2019; doi: 10.1038/s41367-019-0007-3.
  5. Брей Г.А. и др. Наука управления ожирением: научное заявление эндокринного общества. Обзор эндокринологии. 2018; doi: 10.1210/er.2017-00253.
  6. Рейнор Х.А. и др. Позиция Академии питания и диетологии: Вмешательства по лечению избыточного веса и ожирения у взрослых. Журнал Академии питания и диетологии. 2016; doi:10.1016/j.jand.2015.10.031.
  7. Эстегамати А. и др.Дополнительная и альтернативная медицина для лечения ожирения: критический обзор. Международный журнал эндокринологии и метаболизма. 2015 г.; doi: 10.5812/ijem.19678.
  8. Разумное использование пищевых добавок. Национальный центр дополнительного и интегративного здоровья. https://www.nccih.nih.gov/health/using-dietary-supplements-wisely. По состоянию на 27 октября 2020 г.
  9. Вся правда о рекламе похудения. Федеральная торговая комиссия. https://www.consumer.ftc.gov/articles/truth-behind-weight-loss-ads.По состоянию на 27 октября 2020 г.
  10. Bauer BA (экспертное заключение). Клиника Майо. 2 ноября 2020 г.
Подробнее

Товары и услуги

  1. The Mayo Clinic Diet Online
  2. Книга: The Mayo Clinic Diet

.

Алан А. Биттер | Висконсинский лютеранский колледж

Образование

Б.С. Образование, Колледж доктора Мартина Лютера
М.А. Начальное образование, Университет Небраски в Кирни.

Фон

В дополнение к преподавательским обязанностям я работаю директором по сертификации/лицензированию. Я работаю с учителями до начала работы от курсов начального уровня до обучения студентов. Я пришел на эту должность с опытом работы директором и учителем лютеранской школы. Соответствующий опыт включает в себя членство в Совете по профессиональным стандартам Департамента государственного образования, многочисленных группах по аккредитации и рабочей группе по разработке материалов для роста и оценки учителей в лютеранских школах.Когда она не работает с учителями и будущими учителями, любимыми занятиями являются путешествия, внуки и «Штурм Бастилии» каждое лето в Милуоки.

ОБУЧЕНИЕ

  • EDU 201 Образование в разнообразном обществе
  • EDU 221 Учебные и классные комнатные стратегии управления
  • EDU 292 Клинические — General
  • EDU 493 SEMINAR
  • EDU 495 SEMINAL SEQUINAL SUPIDALION
  • EDU 521 Management Management. Стратегии
  • EDU 597 Опыт профессионального развития

интересы исследования

  • Рост и развитие учителей
  • Оценка для информирования преподавателей
  • Дифференцированное обучение
  • Надзор за обучением

Научные работы

  • Есть ли у вас лицензия на подобное преподавание?
  • Составление плана развития министерства
  • Процесс роста и развития министерства WELS

Услуга

  • Рабочая группа по подготовке программы EDU Департамента государственного обучения
  • Комитет по обзору программы WLC
  • Комитет по учебной программе WLC
  • Совет по профессиональным стандартам, Департамент государственного обучения (2008-2011)
  • WELS Growing Educators work in Ministry (GEM) 9 Ведущий модуля «Институт лидерства» — Центр новых учителей, Санта-Крус, Калифорния
  • Член группы по аккредитации и капитан группы по аккредитации религиозных и независимых школ штата Висконсин (WRISA) и Wisconsin Ev.Аккредитация лютеранской синодальной школы (WELSSA)

Профессиональное членство

  • Ассоциация по надзору и разработке учебных программ

6-Метоксифлаваноны как блокаторы рецепторов горького вкуса для hTAS2R39

Abstract

Многие (пищевые) горькие соединения, например, . флавоноиды активируют горький рецептор hTAS2R39 в клеточных анализах. Известно, что некоторые флавоноиды, среди которых некоторые флаваноны, не активируют этот рецептор.Поскольку известно, что некоторые флаваноны сенсорно маскируют горький вкус, флаваноны могут действовать как антагонисты горьких рецепторов. Четырнадцать флаванонов были исследованы на предмет их способности снижать активацию hTAS2R39 галлатом эпикатехина (ЭКГ), одним из основных горьких соединений, содержащихся в зеленом чае. Три флаванона продемонстрировали ингибирующее поведение в отношении активации hTAS2R39 с помощью ЭКГ: 4′-фтор-6-метоксифлаванон, 6,3′-диметоксифлаванон и 6-метоксифлаванон (в порядке убывания активности). 6-метоксифлаваноны также ингибировали активацию hTAS2R14 (еще один горький рецептор, активируемый ЭКГ), хотя и в меньшей степени.Кривые доза-реакция ЭКГ при различных концентрациях полного антагониста 4′-фтор-6-метоксифлаванона и эксперименты с вымыванием показали обратимый непреодолимый антагонизм. Тот же эффект наблюдался для структурно отличного агониста денатония бензоата.

Образец цитирования: Roland WSU, Gouka RJ, Gruppen H, Driesse M, van Buren L, Smit G, et al. (2014) 6-Метоксифлаваноны как блокаторы рецепторов горького вкуса для hTAS2R39. ПЛОС ОДИН 9(4): е94451. https://дои.org/10.1371/journal.pone.0094451

Редактор: Johannes Reisert, Monell Chemical Senses Center, Соединенные Штаты Америки

Получено: 5 декабря 2013 г.; Принято: 16 марта 2014 г.; Опубликовано: 10 апреля 2014 г.

Авторские права: © 2014 Roland et al. Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с лицензией Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания оригинального автора и источника.

Финансирование: Эта работа финансировалась Дельтой пищевых продуктов и питания Министерства экономики Нидерландов (FND 08019, http://www.agentschapnl.nl/subsidies-regelingen/innovatieprogramma-food—nutrition) . Спонсоры не участвовали в разработке исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторов попросили включить измененные заявления о конкурирующих интересах и раскрытие финансовой информации, которые заявляют об аффилированности компаний Unilever и Valio.Это не меняет приверженности авторов политике PLOS ONE в отношении обмена данными и материалами.

Введение

Несмотря на то, что горький вкус может ощущаться в некоторых пищевых продуктах, таких как пиво, кофе, темный шоколад и красное вино [1], в большинстве случаев горечь в пище нежелательна, и предпринимаются усилия, чтобы уменьшить горький вкус [2] . Одним из подходов к маскировке горького вкуса является использование так называемых блокаторов горьких рецепторов, которые ингибируют активацию вкусовых рецепторов, вызванную горьким соединением.На языке человека горечь воспринимается рецепторами горького вкуса человека (hTAS2R, TAS2R или T2R). Активация in vitro этих hTAS2R горькими соединениями интенсивно изучалась в течение последнего десятилетия. Для 21 из 25 горьких рецепторов идентифицирован агонист, а в некоторых случаях десятки агонистов [3], [4]. Напротив, антагонисты горьких рецепторов все еще довольно редки.

Сообщалось, что небольшая молекула (4-(2,2,3-триметилциклопентил)бутановая кислота (или GIV 3727) является ингибитором шести рецепторов горького вкуса [5].Он смог уменьшить сенсорное восприятие горького послевкусия подсластителей ацесульфама К и сахарина, а также активацию hTAS2R31 и hTAS2R43, горьких рецепторов, активируемых этими двумя соединениями. Другим соединением, пониженная активация горького рецептора которого может быть связана с сенсорным восприятием, было p -(дипропилсульфамил)бензойная кислота (более известная как пробенецид). Сообщалось, что он ингибирует активацию hTAS2R16, hTAS2R38 и hTAS2R43 и подавляет восприятие горького вкуса салицина в сенсорных тестах [6].Сообщалось, что соединение может действовать как агонист по отношению к одному подмножеству рецепторов горького вкуса, тогда как оно может действовать как антагонист по отношению к другому подмножеству рецепторов горького вкуса. Это было описано для двух сесквитерпеновых лактонов 3β-гидроксидигидрокостунолида (3HDC) и 3β-гидроксипеленолида (3HP) [7].

Недавно была разработана фармакофорная модель маскеров горького вкуса кофеина [8]. Этот фармакофор был присоединен к гомологической модели hTAS2R10 (один из горьких рецепторов, активируемых кофеином).Стыковка двух веществ, энтеролактона и энтеродиола, предсказала их модулирующую горечь активность, что могло быть подтверждено сенсорными тестами. Докинг был также применен для соединения GIV 3727 в модели hTAS2R31, и было обосновано наличие единственного связывающего кармана [5], в котором могут связываться как агонист, так и антагонист.

Помимо исследований in vitro по блокированию горьких рецепторов, сообщается, что несколько молекул маскируют горький вкус in vivo [2], среди которых флаваноны гомоэриодиктиол, его натриевая соль и эриодиктиол.Они уменьшали горький вкус различных химических классов горьких молекул до 40% с неизвестным механизмом [9]. Не было доказано, что их сенсорный маскирующий горький эффект вызван ингибированием активации рецепторов горького вкуса. Два других флаванона (сакуранетин и 6-метоксисакуранетин) описаны как антагонисты hTAS2R31 [10]. Следовательно, флаваноны, по-видимому, играют важную роль в уменьшении горького вкуса и активации рецепторов горького вкуса.

Рецептор горького вкуса человека hTAS2R39, по-видимому, является горьким рецептором для пищевых соединений, поскольку многие агонисты являются пищевыми соединениями, такими как тиамин (витамин B1), хинин [3], используемый в тонизирующей воде, катехины из зеленого чая [11], вино предшественники танинов [12], небольшие пептиды из гидролизатов казеина [13] и сыра [14], изофлавоны из соевых бобов [15] и многие другие флавоноиды из нескольких растительных источников [16].Следовательно, представляет интерес определить горький блокатор этого рецептора. Вполне вероятно, что антагонист может иметь структурные элементы, сходные с агонистом, чтобы поместиться в тот же связывающий карман. В нашем предыдущем исследовании (изо)флавоноидных агонистов hTAS2R39 несколько протестированных соединений, среди которых флаваноны, не активировали горький рецептор, несмотря на структурное сходство с активными соединениями [16]. Целью настоящего исследования было выяснить, могут ли эти и другие флаваноны действовать как антагонисты hTAS2R39.Было продемонстрировано, что одни флаваноны проявляли антагонистическое поведение, а другие — нет.

Материалы и методы

Материалы

Испытываемые соединения были получены от Extrasynthese (Genay, Франция), Indofine Chemical Company (Hillsborough, NJ, USA), Interbioscreen (Москва, Россия) и Sigma-Aldrich (Steinheim, Германия). Большинство соединений имели чистоту ≥99% или ≥98%; соединение ( 4 ) имело чистоту 95%, а соединение ( 6 ) имело чистоту 92–95%. Каждое соединение растворяли в ДМСО (Sigma-Aldrich) до исходной концентрации 100 мМ.Раствор трипанового синего (0,4% масс./об.) и изопротеренол были приобретены у Sigma-Aldrich.

Буфер Tyrode (140 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 10 мМ глюкозы, 1 мМ MgCl 2 , 1 мМ CaCl 2 и 20 мМ Hepes, pH 7,4) с 0,5 мМ пробенецида (Sigma-Aldrich) использовали для разбавление исходных растворов соединение-ДМСО и для анализов визуализации кальция. Присутствие пробенецида в буфере не приводило к ингибированию hTAS2R14 или hTAS2R39. Сравнение анализов с использованием пробенецида и без него показано в файле S1 .Все соединения тестировали на аутофлуоресценцию и токсическое воздействие на клетки ( File S2 ) при концентрации 1 мМ, как описано ранее [15].

Экспрессия hTAS2R39 и hTAS2R14 в клетках HEK293

Для функциональной экспрессии человеческого рецептора горького вкуса hTAS2R39 использовали клетки HEK293 T-Rex Flp-In (Invitrogen, Сан-Диего, Калифорния, США), стабильно экспрессирующие α-субъединицу химерного G-белка Gα16-gust44 (клонированные в pcDNA4 (Invitrogen)) [17] и гены человеческого горького рецептора для hTAS2R39 (клонированные в pcDNA5/FRT (Invitrogen)).Ген горького рецептора содержал последовательность ДНК, кодирующую первые 45 аминокислот крысиного соматостатинового рецептора типа 3 на его 5′-конце (экспрессия рецептора достигалась согласно [18] за исключением HSV-метки), для улучшения мембранных нацеливание на белок-рецептор. Ту же процедуру применяли для стабильной экспрессии hTAS2R14. Клетки поддерживали в модифицированной Дульбекко среде Игла (DMEM) и 10% (об./об.) FBS без тетрациклина (оба Lonza, Вервье, Бельгия) с добавлением бластицидина (5 мк г/мл), генетицина (400 мк г/мл) и гигромицин (100 мкг/мл г/мл) (все от Invitrogen).Клетки выращивали и поддерживали при 37 °C и 5% (об./об.) CO 2 .

Мониторинг активации горьких рецепторов путем высвобождения внутриклеточного кальция

Клетки высевали в покрытые поли-L-лизином (Sigma-Aldrich) 96-луночные планшеты (черные стенки, прозрачное дно, Greiner bio-one, Frickenhausen, Германия) при плотности 7*10 3 клеток на 100 мк л/лунку и культивировали в течение 24 часов. Транскрипцию рецепторов индуцировали добавлением 0,25 мкг/мл мкг/мл доксициклина (Sigma-Aldrich).Клетки индуцировали в течение 24 ч, а затем загружали кальций-чувствительным флуоресцентным красителем Fluo-4-AM (2,5 мкМ М, Invitrogen), который растворяли в буфере Тироде, содержащем 5% (об./об.) FBS, не содержащей тетрациклин (об./об.). Лонца). Через час после загрузки клетки промывали буфером Тирода и помещали в буфер Тирода. Исходные растворы испытуемых соединений готовили в ДМСО и разбавляли до соответствующей концентрации в буфере Тайрода, не превышая концентрацию ДМСО 1% (об./об.).

Активацию или ингибирование рецептора

измеряли посредством внутриклеточного высвобождения Ca 2+ [19] на FlexStation II 384 или FlexStation III (Molecular Devices Corporation, Саннивейл, Калифорния, США) путем измерения флуоресценции (возбуждение 485 нм/испускание 520 нм) для либо 90 с, либо 240 с при 37°C.Применялись два способа введения соединения: одновременное и поэтапное добавление потенциального антагониста и агониста. Первые 17 с перед добавлением соединения использовали для определения базовой линии. Для одновременного метода агонист и потенциальный антагонист предварительно смешивали, вводили через 17 с и измеряли флуоресценцию в течение всего 90 с. Для ступенчатого метода через 17 с добавляли потенциальный антагонист, измеряли флуоресценцию до 120 с, а через 120 с добавляли агонист и измеряли еще 120 с, всего 240 с.Параллельно измеряли неиндуцированные клетки, которые не экспрессировали вкусовой рецептор, для проверки специфичности активации рецептора. Каждый эксперимент проводили, по крайней мере, дважды в отдельных экспериментах (как указано для каждой фигуры).

Обработка данных анализа кальция

Обработка данных проводилась, как сообщалось ранее [15]. Вкратце, для построения графика сигналов флуоресценции использовали программное обеспечение SoftMax Pro 5.4 (Molecular Devices Corporation). Значение флуоресценции (ΔF/F 0 ), представляющее активность рецептора, рассчитывали путем вычитания базовой линии флуоресценции (F 0 ) до загрузки из максимальной флуоресценции (F) после добавления соединения, деленной на сигнал базовой линии. для нормализации фоновой флуоресценции [20].Кривые доза-реакция были построены как кривые нелинейной регрессии с использованием Graph Pad Prism (версия 4 для Windows, Graph Pad Software, Сан-Диего, Калифорния, США). Были рассчитаны полумаксимальные эффективные концентрации (EC 50 ) и полумаксимальные ингибирующие концентрации (IC 50 ). Столбики погрешностей отражают стандартную ошибку среднего (SEM). Статистический анализ был выполнен в Graph Pad Prism (однофакторный дисперсионный анализ при уровне риска 5% с последующим апостериорным тестом Бонферрони).

Исследование ингибирующего действия флаванонов

Измерение кривых доза-реакция ЭКГ на hTAS2R39 в условиях, использованных в этом исследовании, выявило концентрацию EC 80 , равную 200 мкМ.Скрининг ингибирования hTAS2R39 флаванонами проводили с одновременным применением агониста (200 мкМ ЭКГ) и предполагаемого антагониста (250 мкМ флаванона). Ингибирование было показано, когда . В случае указанного ингибирования применяли флаваноны в различных концентрациях для проверки дозозависимого ингибирования при концентрации ЕС 80 агониста. Другой агонист hTAS2R39, бензоат денатония, использовали в экспериментах по ингибированию в концентрации 1,7 мМ (EC 80 ). Ингибирование hTAS2R14 тестировали с 640 мкМ ЭКГ или 70 мкМ генистеина в качестве агонистов, представляющих их соответствующие концентрации EC 80 .Для исследования специфичности флаванонов в отношении ингибирования hTAS2R39 и hTAS2R14, другой рецептор горького вкуса, hTAS2R16 (неизвестно, что он активируется флавоноидами), использовали в экспериментах по ингибированию ( File S3 ) по отношению к его агонисту салицину.

Чтобы определить, было ли ингибирование специфичным для рецептора горького вкуса, эффект антагонистов был протестирован на агонисте β2-адренергических рецепторов изопротереноле (50 мкМ). Для этого применяли антагонисты в концентрациях ~IC 50 (100 мкМ 4′-фтор-6-метоксифлаванон, 500 мкМ 6,3′-диметоксифлаванон и 500 мкМ 6-метоксифлаванон).Чтобы различить обратимое и необратимое ингибирование, были проведены эксперименты с вымыванием. Клетки стимулировали 200 мкМ ЭКГ в отсутствие и в присутствии каждого антагониста (концентрации ~IC 50 ), промывали буфером Тирода (80 мкМ л/лунку) и снова стимулировали 200 мкМ ЭКГ.

Результаты

Идентификация и характеристика ингибиторов hTAS2R39

В качестве агониста hTAS2R39 был выбран

Галлат эпикатехина (ЭКГ) ( Рисунок 1A ), одно из основных горьких соединений в зеленом чае [11].В предыдущем исследовании мы идентифицировали девять флаванонов как агонисты hTAS2R39, тогда как три других флаванона не активировали этот рецептор [16]. Поскольку сообщалось, что некоторые флаваноны блокируют горький вкус [9], [10], было исследовано, могут ли три неактивных флаванона, а также другие флаваноны обладать антагонистическими свойствами по отношению к hTAS2R39. Четырнадцать флаванонов ( Таблица 1 и Рисунок 1B ) были проверены на их способность снижать активацию hTAS2R39 с помощью ЭКГ.Ингибирование было показано, когда отношение между ответом ЭКГ в присутствии флаванона и ответом ЭКГ в отсутствие флаванона было <1 (, рис. 2, ). На этом рисунке видно, что три соединения показали снижение ответов ЭКГ на hTAS2R39: 6,3′-диметоксифлаванон ( 3 ), 4′-фтор-6-метоксифлаванон ( 6 ) и 6-метоксифлаванон ( 11 ). Ингибирующее действие ( 3 ) и ( 6 ) при скрининговых концентрациях было значительным.Эффект ( 11 ) не был значительным, но, поскольку была видна тенденция к уменьшению ЭКГ-ответов, также ( 11 ) был выбран для исследования поведения доза-реакция.

Рисунок 1. Химическая структура галлата эпикатехина (ЭКГ) (A), исследованных флаванонов (остатки указаны в таблице 1) (B) и агониста hTAS2R39 денатония бензоата (C).

Обычно применяемая номенклатура колец для флавоноидов (кольца А, В и С) показана в общей структурной формуле флаванонов.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0094451.g001

Рисунок 2. Скрининг флаванонов на снижение ЭКГ-ответа на hTAS2R39.

Скрининг проводили с одновременным применением агониста (200 мкМ ЭКГ) и предполагаемого антагониста (250 мкМ флаванона). Ингибирование было показано, когда . Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение n отдельных экспериментов, проведенных в двух экземплярах. Соединения 1 , 2 , 4 , 5 , 7 , 10 : N = 2, Соединения 8 , 9 , 12 , 13 , 14 : n = 3, соединение 3 : n = 4, соединение 6 , 11 : n = 5.Значимость снижения сигнала обозначена ** (p≤0,01) и * (p≤0,05).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0094451.g002

Они были дополнительно исследованы двумя различными способами добавления соединений: одновременным и ступенчатым добавлением. Одновременное добавление к рецептору агониста и антагониста отражает ситуацию идеального применения блокатора в пищевых продуктах. Поэтапное добавление агониста и антагониста обычно применяется в фармацевтических исследованиях при изучении фармакодинамики взаимодействия рецептор-антагонист [21]. На рис. 3 показаны различные способы введения соединения для репрезентативных примеров. На рис. 3A показано одновременное добавление агониста и антагониста, что означает, что после измерения исходной флуоресценции агонист и антагонист были добавлены одновременно (обозначено стрелкой «1 st добавление»). На рис. 3B показано поэтапное добавление агониста и антагониста, что означает, что после измерения исходной флуоресценции сначала добавляли антагонист (или буфер) (обозначено стрелкой «1 st добавление»), а затем добавляли агонист ( обозначено стрелкой «2 и дополнение»).В обоих примерах сигналы кальция, вызванные ЭКГ, уменьшались в присутствии 6-метоксифлаванонов.

Рис. 3. Подсчет флуоресценции ЭКГ-индуцированных кальциевых ответов в клетках, экспрессирующих hTAS2R39 (индуцированных) и неэкспрессирующих hTAS2R39 (неиндуцированных).

A : Одновременное добавление агониста (ЭКГ 200 мкМ) и антагониста (4′-фтор-6-метоксифлаванон ( 6 ) 16 мкМ) (□) по сравнению с сигналом, вызванным ЭКГ (антагонист заменен буфером, окончательный концентрация ЭКГ 200 мкМ) (◊).Неиндуцированные клетки: ЭКГ 200 мкМ и 4′-фтор-6-метоксифлаванон ( 6 ) 16 мкМ (○) и ЭКГ 200 мкМ (Δ). B : Поэтапное добавление сначала антагониста (стрелка «1 st добавление»), а затем агониста (стрелка «2 nd добавление») (1 st 6-метоксифлаванон ( 11 ) 500 мкМ, 2 nd ЭКГ 200 мкМ) (□)) по сравнению с агонистом (1 st буфер, 2 nd ЭКГ 200 мкМ) (◊). Неиндуцированные клетки: 1 st 6-метоксифлаванон ( 11 ) 500 мкМ, 2 nd ЭКГ 200 мкМ (○) по сравнению с буфером 1 st , 2 nd ЭКГ (Δ 200 мкМ).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0094451.g003

Ингибирующие свойства соединений 6,3′-диметоксифлаванон ( 3 ), 4′-фтор-6-метоксифлаванон ( 6 ) и 6-метоксифлаванон ( 11 ) по отношению к hTAS2R39 исследовали с использованием обоих способов добавления соединения. Соединение 4′-фтор-6-метоксифлаванон ( 6 ) показало ингибирующую активность в отношении ЭКГ на hTAS2R39 как после одновременного (, фиг. 4A, ), так и после поэтапного добавления (, фиг. 4B, ).Применение ( 6 ) перед добавлением ЭКГ приводило к 100% блокированию рецепторов (, рис. 4В, ). Для этого полного блокатора рецепторов полумаксимальная ингибирующая концентрация (IC 50 ) составляла 102 мкМ. Обзор порогов ингибирования и значений IC 50 приведен в таблице 2 . Когда ( 6 ) добавляли одновременно с ЭКГ, он имел более низкий порог ингибирования, чем при поэтапном добавлении. При одновременном добавлении максимальное снижение сигнала на 65% было достигнуто при 63 мкМ, и дальнейшее снижение сигнала не наблюдалось из-за неспецифических сигналов самого соединения.То же самое относится и к одновременному добавлению 6,3-диметоксифлаванона ( 3 ) ( Рисунок 4C ), где максимальное снижение сигнала на 55% было достигнуто при 500 мкМ. Из-за увеличения неспецифических сигналов ( 3 ) невозможно было установить полную эффективность при одновременном добавлении. Как показано на рис. 4D , максимальное снижение ~85% при 1000 мкМ было достигнуто с помощью ( 3 ) после пошагового добавления. В отличие от ( 6 ) и ( 3 ), соединение 6-метоксифлаванон ( 11 ) проявляло незначительную ингибирующую активность в отношении ЭКГ на hTAS2R39 при одновременном применении (, рис. 4E ), тогда как оно проявляло ингибирующую активность при одновременном применении. ступенчато (ок.50% снижение активации при 500 мкМ) (, рисунок 4F, ). Таким образом, при исследовании ингибирующего поведения идентифицированных соединений стало ясно, что способ добавления антагониста влияет на эффективность антагониста.

Рисунок 4. Ингибирование ответа 200 мкМ ЭКГ (—) на hTAS2R39 (индуцированное (•), неиндуцированное (○)) 4′-фтор-6-метоксифлаваноном ( 6 ) после одновременного добавления (n = 5) ( A ) и ступенчатое добавление (n = 4) ( B ), 6,3′-диметоксифлаванон ( 3 ) после одновременного добавления (n = 4) ( C ) и ступенчатое добавление (n = 3) ( D ) и 6-метоксифлаванон ( 11 ) после одновременного добавления (n = 5) ( E ) и ступенчатого добавления (n = 3) ( F ).

Данные представлены как среднее значение ±SEM для n отдельных экспериментов, проведенных в двух повторностях.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0094451.g004

Затем было исследовано, может ли активация hTAS2R39 другим агонистом также снижаться с помощью идентифицированных ингибиторов. Бензоат денатония ( Фигура 1С ) был выбран в качестве хорошо известного агониста hTAS2R39, который отличается от ЭКГ структурой и концентрациями активации. Были измерены кривые доза-реакция бензоата денатония, EC 50 711 мкМ и EC 80 1.Было установлено 7 мМ (данные не показаны). На рис. 5 показано ингибирующее поведение 4′-фтор-6-метоксифлаванона ( 6 ) по отношению к 1,7 мМ бензоата денатония на hTAS2R39. Наблюдались те же тенденции, что и для ЭКГ в сочетании с антагонистами. Активация рецептора бензоатом денатония снижалась при одновременном добавлении ( 6 ) до концентрации 63 мкМ (больше не снижалась из-за усиления неспецифических сигналов), что приводило к максимальному снижению сигнала на 58%.Ступенчатое применение ( 6 ) привело к 100% блокированию рецепторов, что уже было видно на ЭКГ. Расчетное значение IC 50 составило 55 мкМ. Результаты всех антагонистов, применяемых с бензоатом денатония, суммированы в Таблице 2 . В связи с тем, что структурно разные агонисты ингибировались сходным образом, мы пришли к выводу, что сниженный рецепторный ответ был достигнут не за счет взаимодействия между агонистом и ингибитором, а за счет фактического антагонизма к рецептору.

Рисунок 5.Ингибирование ответа 1.7(—) на hTAS2R39 (индуцированное (•), неиндуцированное (○)) 4′-фтор-6-метоксифлаваноном (6) после одновременного добавления (n = 4) (A) и пошагового сложение (n = 4) (B).

Данные представлены как среднее значение ±SEM для n отдельных экспериментов, проведенных в двух повторностях.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0094451.g005

Специфичность ингибиторов hTAS2R39

Было исследовано, ингибируют ли идентифицированные антагонисты специфически hTAS2R39 или также hTAS2R14, поскольку многие флавоноиды ведут себя одинаково по отношению к этим двум рецепторам [16].В качестве агониста hTAS2R14 использовали ЭКГ. На рис. 6 показано, что при одновременном применении 4′-фтор-6-метоксифлаванона ( 6 ) и ЭКГ (здесь при 640 мкМ, EC 80 на hTAS2R14) блокирования hTAS2R14 не происходило. Увеличение сигнала при повышении концентрации ( 6 ) носит неспецифический характер, что также можно увидеть в увеличении ответа неиндуцированных клеток, в которых горький рецептор не экспрессирован. При ступенчатом применении наблюдался ингибирующий эффект.Три метоксифлаванона также тестировали с генистеином, другим агонистом hTAS2R14, в концентрации 70 мкМ (EC 80 ). Результаты были аналогичны результатам, полученным с помощью ЭКГ. Обзор порогов ингибирования и значений IC 50 для hTAS2R14 приведен в Таблице 3 . Примечательно, что ни один из трех метоксифлаванонов не блокировал hTAS2R14 при одновременном применении с одним из агонистов.

Рис. 6. Ингибирование ответа 640 мкМ ЭКГ (—) на hTAS2R14 (индуцированное (•), неиндуцированное (○)) 4′-фтор-6-метоксифлаваноном (6) после одновременного добавления (n = 2 ) (A) и ступенчатое сложение (n = 3) (B).Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего для n отдельных экспериментов, проведенных в двух экземплярах.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0094451.g006

Для дальнейшего изучения специфичности идентифицированных антагонистов вкусовых рецепторов измеряли изопротереноловые ответы. Подавление реакции изопротеренола указывает на неспецифическое ингибирование β2-адренорецепторов, эндогенных для клеток HEK293. Результаты (, фигура 7, ) показывают, что реакции изопротеренола не уменьшались, и, таким образом, ингибирование является специфичным для вкусовых рецепторов.Кроме того, специфичность антагонистов была дополнительно исследована путем измерения их активности в отношении другого рецептора горького вкуса, hTAS2R16. Блокирования ответов салицина на hTAS2R16 не наблюдалось ни при одновременном, ни при поэтапном добавлении ( File S3 ).

Рисунок 7. Реакция изопротеренола на применение с буфером, 4′-фтор-6-метоксифлаваноном (6), 6,3′-диметоксифлаваноном (3) и 6-метоксифлаваноном (11).

Данные представлены как среднее ± SEM репрезентативного эксперимента, проведенного в четырех повторах.н.с., не имеет значения.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0094451.g007

Фармакологическая характеристика 4′-фтор-6-метоксифлаванона

Благодаря полному устранению агонистических реакций 4′-фтор-6-метоксифлаванона ( 6 ) на hTAS2R39 эта молекула оказалась наиболее эффективным антагонистом, выявленным в этом исследовании. Механизм антагонизма был дополнительно выяснен путем измерения кривых доза-реакция ЭКГ ( Рисунок 8A ) и бензоата денатония ( Рисунок 8B ) в присутствии различных концентраций ( 6 ).При увеличении концентрации антагониста наблюдались два эффекта: кривые доза-реакция смещались вправо, а амплитуды сигналов уменьшались. Кривые доза-реакция для ингибирования ЭКГ и денатония бензоата показали ту же картину. Были рассчитаны значения EC 50 для всех концентраций антагониста, которые приведены в таблице 4 .

Рисунок 8. Кривые доза-реакция для галлата эпикатехина (ЭКГ) (•) (n = 2) (A) и бензоата денатония (•) (n = 2) (B) на hTAS2R39 и их модификация путем увеличения 4′- концентрации фтор-6-метоксифлаванона (6) (○ 50 мкМ, Δ 100 мкМ, □ 200 мкМ).

Антагонист и агонист добавлялись поэтапно. Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего для n отдельных экспериментов, проведенных в двух экземплярах. Эксперименты с вымыванием (n = 2) (C). Клетки стимулировали 200 мкМ ЭКГ в отсутствие (светлые столбцы) и в присутствии (закрашенные столбцы) 100 мкМ 4′-фтор-6-метоксифлаванона (6) или 500 мкМ 6,3′-диметоксифлаванона (3). или 500 мкМ 6-метоксифлаванона (11), промытого буфером Тирода и снова стимулированного 200 мкМ ЭКГ (заштрихованные столбцы; контроль: серый столбец).Антагонист и агонист добавляли поэтапно. Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего для n отдельных экспериментов, проведенных в четырех повторностях. Значимость снижения сигнала обозначена *** (p≤0,001), ** (p≤0,01) и нс. (незначимо, р>0,05).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0094451.g008

Чтобы различать обратимое и необратимое ингибирование, были проведены эксперименты с вымыванием. На Фигуре 8С ясно видно, что ингибирование было обратимым.

Обсуждение

В этой статье мы впервые описываем, насколько нам известно, идентификацию антагонистов hTAS2R39. Для hTAS2R39 в качестве антагонистов были идентифицированы 4′-фтор-6-метоксифлаванон ( 6 ), 6,3′-диметоксифлаванон ( 3 ) и 6-метоксифлаванон ( 11 ) (в порядке убывания активности). среди которых ( 6 ) полностью устранили агонистический ответ. Это наблюдалось как для ЭКГ флавоноида горького чая, так и для синтетического горького соединения денатония бензоата.Активация hTAS2R14, другого горького рецептора, распознающего ЭКГ [16], также ингибировалась тремя флаванонами, хотя и в меньшей степени. Механистическое объяснение различных эффектов, наблюдаемых после одновременного и поэтапного применения, еще предстоит установить.

Ввиду того, что применение ( 11 ) и ( 3 ) не приводило к полному ингибированию сигнала ЭКГ на hTAS2R39, возникает вопрос, являются ли эти два соединения антагонистами или частичными агонистами.Их также тестировали на агонизм hTAS2R39, но ни один из них не активировал рецептор ( File S4 ). Следовательно, они, вероятно, действуют как настоящие антагонисты.

Структурные требования к антагонистам hTAS2R39

Несколько флаванонов, подобных идентифицированным антагонистам, не проявляли ингибирующей активности в отношении горького рецептора hTAS2R39. Оказалось, что только флаваноны с метоксигруппой в 6-м положении кольца А и различными конфигурациями кольца В способны действовать как антагонисты hTAS2R39, как флаванон ( 5 ) (замена флаванона имеет решающее значение для ингибирования ), 6-гидроксифлаванон ( 8 ) (метоксизамещение имеет решающее значение для ингибирования), 4′-метоксифлаванон ( 13 ) (метоксилирование А-кольца имеет решающее значение для ингибирования) и 7-метоксифлаванон ( 12 ) (6- критическое для торможения положение) не проявляли ингибиторной активности.Кроме того, соединение 6-метоксифлавон не способно ингибировать активацию hTAS2R39 (данные не показаны), что указывает на то, что отсутствие двойной связи в С-кольце необходимо для ингибирования.

Среди антагонистов, идентифицированных для hTAS2R39, разница в замене кольца B определяла блокирующую активность. Соединение ( 11 ), незамещенное в кольце В, показало плохое блокирующее поведение по сравнению с ( 6 ) и ( 3 ). Можно предположить, что размер, электроотрицательность и/или электроноакцепторный эффект заместителя В-кольца влияют на активность антагонистов.

Фармакологическая характеристика 4′-фтор-6-метоксифлаванона

Благодаря полному устранению агонистических реакций (при их концентрациях EC 80 ) 4′-фтор-6-метоксифлаванона ( 6 ) на hTAS2R39 эта молекула была дополнительно исследована в отношении возможного антагонистического механизма. При увеличении концентрации 4′-фтор-6-метоксифлаванона наблюдались два эффекта: кривые доза-реакция смещались вправо, а амплитуды сигналов уменьшались.Эти явления позволяют предположить, что его можно классифицировать как непреодолимого антагониста [22]. Эта кривая может указывать на три различных механизма: (i) необратимый антагонизм, (ii) обратимый неконкурентный ортостерический антагонизм, при котором равновесие не достигается, и (iii) обратимый непреодолимый аллостерический антагонизм [22]. Эксперименты с вымыванием (, фиг. 8C, ) ясно показали, что ЭКГ-ответы после вымывания антагониста были аналогичны ЭКГ-ответам до применения антагониста.Таким образом, можно сделать вывод, что взаимодействие было обратимым. Чтобы различить (ii) и (iii), можно изучить два аспекта: (а) зависит ли антагонист от зонда, что означает, что его антагонистические характеристики (отраженные в виде кривых) отличаются по отношению к структурно различным агонистам, и (b ) является ли эффект антагониста насыщаемым, что означает, что никакая концентрация антагониста не может привести к полному устранению сигнала агониста. Зондовая зависимость (а) и насыщаемость (б) указывают на механизм (iii) [22].При изучении ингибирующего поведения 4′-фтор-6-метоксифлаванона с двумя структурно различными агонистами было обнаружено, что синтетический агонист hTAS2R39 денатония бензоат также ингибируется 4′-фтор-6-метоксифлаваноном (, фигура 8B, ). и продемонстрировал характер кривой, почти такой же, как на ЭКГ (, фигура 8A, ) при различных концентрациях блокатора. Эти аналогичные результаты для двух структурно различных агонистов могут, с одной стороны, указывать на ортостерический антагонизм, но, с другой стороны, они не исключают полностью аллостерический антагонизм.Если бы антагонист был неспособен ингибировать структурно отличающийся агонист, это убедительно свидетельствовало бы об аллостерическом антагонизме. Однако определение аллостеризма путем наблюдения за зависимостью от зонда является односторонней связью [22], а это означает, что отсутствие зависимости от зонда не является определенным доказательством ортостеризма. То же самое относится и к насыщаемости, которая не рассматривалась.

Для hTAS2R46, hTAS2R31, hTAS2R43 [23], hTAS2R16 [24] и hTAS2R38 [25] моделирование стыковки с моделями гомологии, подтвержденное сайт-направленным мутагенезом, предсказало наличие единственного связывающего кармана в соответствующих горьких рецепторах.Более того, механизм антагонизма GIV3727 на hTAS2R31 был описан как ортостерический, непреодолимый антагонизм [5], поддерживаемый стыковкой антагониста в том же связывающем кармане, что и агонист. Напротив, одно исследование предполагает аллостерический антагонизм как механизм ингибирования hTAS2R16 и hTAS2R38 пробенецидом [6]. Пока еще не сообщалось о связывающем кармане hTAS2R39. Поскольку большинство исследований предполагает наличие одного связывающего кармана в различных рецепторах горького, а относительно небольшой внеклеточный домен горьких рецепторов оставляет мало места для другого сайта связывания (в отличие от рецепторов сладкого, где второй сайт связывания присутствует в большой N-концевой внеклеточный домен [26]), ортостерический механизм кажется более вероятным для объяснения наших наблюдений.Однако при исследованных концентрациях антагониста не было достигнуто полной элиминации сигнала, поэтому нельзя исключать возможность аллостерического механизма.

Применение блокаторов горьких рецепторов

Для применения блокаторов в пищевых продуктах необходимо соблюдение ряда требований. (i) Блокатор должен быть функциональным при низкой дозе. Следовательно, антагонист, который должен применяться в эквимолярном или большем количестве по отношению к агонисту, не эффективен. (ii) Для блокирования горького вкуса пищевых соединений по практическим причинам необходимо, чтобы блокатор горьких рецепторов также функционировал при одновременном применении с горьким соединением.Следовательно, такие соединения, как ( 3 ) и ( 6 ), кажутся более подходящими, чем ( 11 ). (iii) Для достижения сенсорного эффекта желательно блокировать все горькие рецепторы, активируемые одним соединением. Блокатор, который может ингибировать только hTAS2R39, но не hTAS2R14, может быть слишком специфичным для эффективного уменьшения горечи на ЭКГ. С другой стороны, пока неизвестно, играют ли эти два рецептора одинаково важную роль во рту. (iv) Блокатор предпочтительно должен быть природного происхождения и должен быть доступен в достаточном количестве.Мы не смогли найти какого-либо природного источника трех ингибиторов, описанных в этом исследовании, и предполагаем, что они доступны только синтетическим путем. (v) Только соединения, известные как безопасные для потребления, представляют интерес для применения в пищевых продуктах. Из-за неизвестной безопасности 4′-фтор-6-метоксифлаванона мы воздержались от сенсорных тестов, которые могли бы подтвердить функцию блокатора горького вкуса in-vivo . Поскольку не всем критериям соответствуют блокаторы, обнаруженные в настоящем исследовании, они могут быть неприменимы к пищевым продуктам.Тем не менее, 6-метоксизаместитель в А-кольце флаванона был идентифицирован как важный для ингибирования hTAS2R39, что может служить основой для других, более подходящих блокаторов.

Благодарности

Мы благодарим доктора Гууса Дюшато (Unilever R&D, Влардинген, Нидерланды) за конструктивные обсуждения фармакологии горьких рецепторов.

Вклад авторов

Задумал и разработал эксперименты: WSUR RJG HG MD LVB GS JPV.Выполняли эксперименты: WSUR RJG MD. Проанализированы данные: WSUR RJG MD. Предоставленные реагенты/материалы/инструменты для анализа: LVB. Написал статью: WSUR RJG HG MD LVB GS JPV.

Каталожные номера

  1. 1. Древновски А., Гомес-Карнерос С. (2000) Горький вкус, фитонутриенты и потребитель: обзор. Являюсь. Дж. Клин. Нутр. 72: 1424–1435.
  2. 2. Ley JP (2008) Маскировка вкуса молекулами. Хемосенс. Восприятие. 1: 58–77.
  3. 3. Мейерхоф В., Батрам С., Кун С., Брокхофф А., Чудоба Э. и др.(2010) Диапазоны молекулярной чувствительности человеческих рецепторов горького вкуса TAS2R. хим. Чувств. 35: 157–170.
  4. 4. Thalmann S, Behrens M, Meyerhof W (2013)Основные гаплотипы человеческого рецептора горького вкуса TAS2R41 кодируют функциональные рецепторы хлорамфеникола. Биохим. Биофиз. Рез. коммун. 435: 267–273.
  5. 5. Slack JP, Brockhoff A, Batram C, Menzel S, Sonnabend C и др. (2010) Модуляция восприятия горького вкуса низкомолекулярным антагонистом hTAS2R.Курс. биол. 20: 1104–1109.
  6. 6. Грин Т.А., Аларкон С., Томас А., Бердуго Э., Доранц Б.Дж. и др. (2011) Пробенецид ингибирует рецептор горького вкуса человека TAS2R16 и подавляет восприятие горького салицина. PLoS ONE 6: e20123.
  7. 7. Брокхофф А., Беренс М., Рудницкий Н., Аппендино Г., Авонто С. и соавт. (2011)Агонизм и антагонизм рецепторов пищевых горьких соединений. Дж. Нейроски. 31: 14775–14872.
  8. 8. Ley JP, Dessoy M, Paetz S, Blings M, Hoffmann-Lücke P, et al.(2012)Идентификация энтеродиола как маскирующего фактора горечи кофеина с использованием модели фармакофора, основанной на структурных аналогах гомоэриодиктиола. Дж. Агрик. Пищевая хим. 60: 6303–6311.
  9. 9. Ley JP, Krammer G, Reinders G, Gatfield IL, Bertram HJ (2005)Оценка горьких маскирующих флаванонов из Herba Santa ( Eriodictyon californicum (H. & A.) Torr., Hydrophyllaceae ). Дж. Агрик. Пищевая хим. 53: 6061–6066.
  10. 10. Флетчер Дж. Н., Кингхорн А. Д., Слэк Дж. П., Маккласки Т. С., Одли А. и др.(2011) In vitro Оценка флавоноидов из Eriodictyon californicum на антагонистическую активность против рецептора горечи hTAS2R31. Дж. Агрик. Пищевая хим. 59: 13117–13121.
  11. 11. Нарукава М., Нога С., Уэно Ю., Сато Т., Мисака Т. и др. (2011)Оценка горечи катехинов зеленого чая с помощью клеточного анализа с человеческим рецептором горького вкуса hTAS2R39. Биохим. Биофиз. Рез. коммун. 405: 620–625.
  12. 12. Соарес С., Коль С., Тальманн С., Матеус Н., Мейерхоф В. и соавт.(2013) Различные фенольные соединения активируют разные рецепторы горького вкуса человека. Дж. Агрик. Пищевая хим. 61: 1525–1533.
  13. 13. Уэно Ю., Сакураи Т., Окада С., Абэ К., Мисака Т. (2011) Рецепторы горького вкуса человека hTAS2R8 и hTAS2R39 с дифференциальными функциями распознавания горьких пептидов. Бионауч. Биотехнолог. Биохим. 75: 1188–1190.
  14. 14. Коль С., Беренс М., Дункель А., Хофманн Т., Мейерхоф В. (2013)Аминокислоты и пептиды активируют по крайней мере пять членов семейства рецепторов горького вкуса человека.Дж. Агрик. Пищевая хим. 61: 53–60.
  15. 15. Roland WSU, Vincken JP, Gouka RJ, van Buren L, Gruppen H и др. (2011)Изофлавоны сои и другие изофлавоноиды активируют рецепторы горького вкуса человека hTAS2R14 и hTAS2R39. Дж. Агрик. Пищевая хим. 59: 11764–11771.
  16. 16. Roland WSU, van Buren L, Gruppen H, Driesse M, Gouka RJ и др. (2013)Активация рецепторов горького вкуса флавоноидами и изофлавоноидами: смоделированные структурные требования для активации hTAS2R14 и hTAS2R39.Дж. Агрик. Пищевая хим. 61: 10454–10466.
  17. 17. Ueda T, Ugawa S, Yamamura H, Imaizumi Y, Shimada S (2003)Функциональное взаимодействие между вкусовыми рецепторами T2R и α-субъединицами G-белка, экспрессируемыми в клетках вкусовых рецепторов. Дж. Нейроски. 23: 7376–7380.
  18. 18. Беренс М., Брокхофф А., Кун С., Буфе Б., Винниг М. и др. (2004) Вкусовой рецептор человека hTAS2R14 реагирует на множество различных горьких соединений. Биохим. Биофиз. Рез. коммун. 319: 479–485.
  19. 19.Чандрашекар Дж., Мюллер К.Л., Хун М.А., Адлер Э., Фенг Л. и др. (2000) T2R функционируют как рецепторы горького вкуса. Ячейка 100: 703–711.
  20. 20. Kuhn C, Bufe B, Winnig M, Hofmann T, Frank O, et al. (2004) Рецепторы горького вкуса для сахарина и ацесульфама KJ Neurosci. 24: 10260–10265.
  21. 21. Кенакин Т. (2006) Учебник по фармакологии. Теория, приложения и методы. 2 изд.; Академическая пресса: Нью-Йорк.
  22. 22. Кенакин Т., Дженкинсон С., Уотсон С. (2006) Определение силы и молекулярного механизма действия непреодолимых антагонистов.Дж. Фармакол. Эксп. Терапия 319: 710–723.
  23. 23. Брокхофф А., Беренс М., Нив М.Ю., Мейерхоф В. (2010)Структурные требования к активации рецепторов горького вкуса. проц. Натл. акад. науч. США 107: 11110–11115.
  24. 24. Сакураи Т., Мисака Т., Исигуро М., Масуда К., Сугавара Т. и др. (2010) Характеристика сайта связывания β-D-глюкопиранозида человеческого рецептора горького вкуса hTAS2R16. Дж. Биол. хим. 285: 28373–28378.
  25. 25. Biarnés X, Marchiori A, Giorgetti A, Lanzara C, Gasparini P, et al.(2010)Понимание связывания агониста фенилтиокарбамида (PTC) с его целевым человеческим горьким рецептором TAS2R38. ПЛОС ОДИН 5: e12394.
  26. 26. Xu H, Staszewski L, Tang H, Adler E, Zoller M, et al. (2004) Различные функциональные роли субъединиц T1R в гетеромерных вкусовых рецепторах. проц. Натл. акад. науч. США 101: 14258–14263.

Абрикосовые косточки (горькие и сладкие) | Часто задаваемые вопросы

В.Безопасно ли есть косточки абрикоса?
FSAI не рекомендует употреблять косточки абрикоса из-за риска отравления цианидом. Этот совет относится к сырым, необработанным ядрам абрикосов и их порошкообразным формам.

Если вы все-таки решите их съесть, вам не следует съедать более 0,37 г на взрослого человека в день, что эквивалентно 1-2 маленьким ядрам. Употребление в пищу большего количества может вызвать острый риск для здоровья. Детям нельзя есть абрикосовые косточки.

В. На чем основан этот совет?
Наши рекомендации основаны на последнем научном заключении Европейского агентства по безопасности пищевых продуктов (EFSA).Для получения дополнительной информации см. пресс-релиз EFSA.

В В чем проблема?
Абрикосовые косточки содержат растительный токсин амигдалин, который после употребления в пищу превращается в цианид. Отравление цианидом может вызвать тошноту, лихорадку, головные боли, бессонницу, жажду, вялость, нервозность, боли в суставах и мышцах и падение кровяного давления. В крайних случаях это смертельно.

В. Что такое косточки абрикоса?
Ядро абрикоса — это семя внутри косточки абрикоса.Его получают путем вскрытия и удаления твердой каменной оболочки.

Эти ядра могут быть горькими или сладкими и, как известно, содержат различное количество амигдалина. Поскольку нет четкого различия между содержанием амигдалина в горьких и сладких сортах, эти рекомендации по потреблению относятся как к горьким, так и к сладким ядрам абрикосов.

В. Безопасно ли есть абрикос?
Да, употребление в пищу плодов абрикоса не представляет опасности для здоровья потребителей, так как ядро, находящееся внутри косточки абрикоса, не контактирует с плодом абрикоса.

В. Существуют ли ограничения на продажу абрикосовых косточек?
Да. Согласно Регламенту Комиссии (ЕС) № 2017/1237, ядра абрикосов (необработанные целые, молотые, молотые, треснутые или нарезанные) не должны содержать более 20 мг/кг синильной кислоты. Кроме того, как правило, предприятия пищевой промышленности не должны размещать на рынке небезопасные пищевые продукты и должны предоставлять потребителю соответствующие инструкции по использованию на этикетке пищевых продуктов.

В. Как насчет маркировки?
FSAI рекомендует маркировать ядра абрикосов, информируя потребителей о том, что взрослые должны съедать не более 1-2 небольших косточек в день из-за риска отравления цианидом.Информация о том, что косточки абрикоса не подходят для детей, также должна быть указана на этикетке.

Медицинские заявления не должны касаться какой-либо пищи. Абрикосовые косточки ошибочно рекламировались как обладающие противораковым действием. Это привело к тому, что некоторые люди отравились цианидом после употребления более двух ядер в день.

В. Как насчет горького миндаля?
Хотя исследование EFSA специально не касалось горького миндаля, исследования показали, что уровень амигдалина в сыром горьком миндале аналогичен уровню абрикосовых косточек.Поэтому FSAI не рекомендует есть горький миндаль из-за риска отравления цианидом.

В. Я съел абрикосовые косточки или горький миндаль и плохо себя чувствую. Что я должен делать?
Если вы съели абрикосовые косточки или горький миндаль и почувствовали себя плохо, вам следует как можно скорее обратиться к врачу.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.