Синька при стоматите у детей отзывы: Раствор для наружного применения ОАО «Самарамедпром» Метиленовый синий — «Стоматит не проходит?…2-3 дня применения метиленовой синьки и улучшения на лицо!»

Содержание

Стоматит: симптомы и лечение — Статьи о стоматологии на портале 100zubov, честные рейтинги и отзывы пациентов и стоматологов.

Стоматит относится к болезням слизистых оболочек ротовой полости, и возникает у детей и взрослых людей, нередко становясь причиной затруднения при попытке говорить или принимать пищу. О том, что такое стоматит, симптомы и лечение, которое имеет  общие принципы и различия, мы расскажем в этой статье. Насколько помогают местные  средства (синька от стоматита, зеленка и пр.) и когда их нужно принимать?

Причины стоматита и начальные признаки

Доказано, что имеется целый ряд факторов, способных вызвать стоматит, к которым относят:

  • Иммунодефицит и развитие патогенной флоры в ротовой полости.
  • Недостаток питательных компонентов в еде.
  • Травмы с последующим воспалением.
  • Нарушение гигиены.
  • Наличие протезов.
  • Усердная санация  и уход за деснами и зубами.
  • Обезвоживание.
  • Вредные привычки.
  • Хроническая инфекция.
  • Облучение, химиотерапия.

При заболевании стоматит причины и лечение этих причин напрямую связаны, так как лечение без поиска и устранения причин неизбежно приведет к появлению рецидивов. Прежде чем приступать к лечению, нужно знать симптомы стоматита, к которым относят:

  • Покраснение, отечность и жжение на внутренней поверхности губ, щек, на небе или под языком.
  • Образование неглубоких язвочек с ровными краями.
  • Формирование в центре язвочек пленки белого или серого цвета.
  • Четкая граница между краем язвы и здоровой тканью.
  • Резкая болезненность при употреблении напитков, еды или при разговоре.
  • Повышение температуры (часто бывает у малышей).

Лечение стоматита

Чтобы терапия стоматита было успешной, нужно знать возбудителя, так как при заболевании стоматит причины и лечение обычно взаимосвязаны. По признакам и типу возбудителя различают несколько видов стоматита, каждый из которых имеет свои отличительные признаки:

  • Грибковый стоматит (молочница) – возбудителем являются грибки рода Candida. Особенность течения состоит в появлении на слизистых белых, напоминающих творог, пленок.
  • Герпетический стоматит – возбудителем является вирус герпеса. Характерный признак – появление пузырьков, которые лопаются, и увеличение лимфоузлов.
  • Бактериальный стоматит – может быть вызван любой бактерией, обитающей в ротовой полости.
  • Ангулярный стоматит (заеды) – характерным признаком можно считать появление трещин в зоне уголков рта.
  • Эрозивно-язвенный стоматит – во рту появляются многочисленные язвочки, которые постепенно сливаются между собой, образуя афты.

Особенности лечения стоматита есть как у взрослых, так и у детей, но общими принципами являются:

  1. Стоматит легкой степени лечится местными средствами (противовоспалительные, обезболивающие, дезинфицирующие препараты). Такие средства, как винилин, содовый раствор, бура с глицерином,  фурацилин, метиленовая синька при стоматите дают заживление уже на 3 день.
  2. К терапии язвенной формы добавляют препараты, воздействующие на причину болезни (антибиотики, противовирусные, противогрибковые средства). В качестве местного средства добавляют препараты с ранозаживляющим действием и народные методы.
  3. Лечение вирусного и особенно афтозного стоматита включает иммуномодуляторы, кортикостероидные средства для местного использования, физиотерапию.

действие антисептика, недостатки, лечение антисептиком

Обновлено 4 мая 2021 г.

Редактор: Гафизов Ален Алиевич

стоматолог-ортопед, стоматолог-хирург, стоматолог-имплантолог

Стоматология ДЕНТУМ м. Полежаевская

Содержание:

Метиленовая синька, или раствор метиленового синего – это антисептик, известный многим с детства. Раньше он был так же популярен, как зеленка, однако сейчас этот препарат становится все труднее найти. Благодаря своему антисептическому действию, синька широко применяется для обеззараживания, в том числе она эффективна при стоматите.

Действие метиленовой синьки

Метиленовая синька оказывает антисептическое воздействие за счет того, что она способна связывать белки в клетках бактерий. Также синька хорошо реагирует с мукополисахаридами, за счет чего патогенные микроорганизмы быстро гибнут.

Метиленовый синий абсолютно безопасен, так что его можно применять при лечении пациентов любых возрастов, в том числе детей. Его раствор не всасывается в кровь и вообще не преодолевает кожные барьеры, что и делает его безопасным и весьма эффективным.

Hаствор метиленового синего

Недостатки метиленовой синьки

Несмотря на все достоинства метиленовой синьки, она все-таки сейчас практически вышла из употребления. Это связано с двумя существенными недостатками:

  • Раствор метиленового синего окрашивает кожу и слизистую
  • Хранить раствор можно совсем немного времени

Кроме того, метиленовый синий хорошо справляется с кандидозом, но совсем неэффективен против ряда бактерий и вирусов. Из-за этого метиленовая синька и оказалась вытеснена другими, более современными и эффективными препаратами.

Лечение метиленовой синькой

Следует сразу сказать, что самостоятельное лечение стоматита метиленовой синькой проводить ни в коем случае не стоит. Стоматит – это достаточно серьезное заболевание, которое в некоторых случаях требует оперативного вмешательства врача. Именно поэтому очень важно первым делом обратиться к стоматологу, и только потом по его рекомендации использовать синьку для лечения.

Раствор метиленового синего следует наносить на ватный тампон или ватную палочку, а затем аккуратно покрывать им язвы или афты.

Взрослым следует обрабатывать пораженные участки минимум шесть раз в сутки, а лучше вообще по 15 раз за день. Детям следует делать аппликации 3-6 раз в день.

При благоприятном исходе афты заживают буквально за 2-3 дня.

Читайте больше полезной информации в Вконтакте

Полезная статья?

Сохрани, чтобы не потерять!

Отказ от ответственности: Этот материал не предназначен для обеспечения диагностики, лечения или медицинских советов. Информация предоставлена только в информационных целях. Пожалуйста, проконсультируйтесь с врачом о любых медицинских и связанных со здоровьем диагнозах и методах лечения. Данная информация не должна рассматриваться в качестве замены консультации с врачом.

Читайте также

Нужна стоматология? Стоматологии Самары

Выберите метроРоссийскаяМосковскаяГагаринскаяСпортивнаяСоветскаяПобедаБезымянкаКировскаяЮнгородокАлабинская

Посмотрите стоматологии Самары с услугой «Лечение стоматита»

Возле метроРоссийскаяМосковскаяГагаринскаяСпортивнаяСоветскаяПобедаБезымянкаКировскаяЮнгородокАлабинская

способы применения и возможные побочные эффекты

Раствор метиленового синего, больше известный в широких массах как синька, является эффективным антисептическим средством.

Он обладает отличным бактерицидным и ранозаживляющим действием, поэтому его часто используют при .

Отсутствие спирта в составе исключает вероятность отравлений или ожогов слизистой. При лечении синькой медицинской, инструкция которой подробно описывает показания и противопоказания, следует обратить внимание на возможные побочные действия.

Основным действующим компонентом медицинской синьки является метилтиония хлорид. Дополнительным веществом выступает дистиллированная вода.

Механизм действия заключается в способности антисептика соединяться с патогенными бактериями и нейтрализовать их пагубное воздействие. В итоге в полости рта уничтожаются все вредные микробы.

Раствор метиленового синего

Синька от стоматита (отзывы об эффективности препарата довольно впечатляющие) применяется местно на поврежденную кожу (в том числе и слизистую оболочку), и поскольку он не проникает в кровь, то не может вызвать токсические отравления. А значит, печень и другие органы не могут пострадать.

Метиленовая синька при стоматите применяется в виде 1% водного раствора, который не вызывает неприятного ощущения во рту и не приводит к ожогам слизистой.

Из-за ярко синего цвета препарат обладает окрашивающими свойствами. Поэтому синька медицинская применение имеет точечное, и при манипуляциях рекомендуется пользоваться перчатками.

И внутривенно, и наружно

Свойства метиленового синего позволяют использовать его в различных областях медицины наружно и внутривенно. Он представляет собой кристаллический порошок, из которого можно приготовить спиртовой или водный раствор.

Медицинская синька рекомендуется к применению в качестве местного средства в следующих случаях:

  • при различных повреждениях кожного покрова – наружно путем смазывания участков спиртовым раствором;
  • как антисептик для промывания зараженных полостей;
  • при воспалениях слизистых оболочек или кожного покрова;
  • синьку используют при мочеполовых заболеваниях непосредственно для промывания уретры.

Внутривенно медицинская синька назначается:

  • для диагностирования или лечения почечных патологий;
  • при отравлениях сероводородом, угарным газом или цианистыми соединениями синька используется в качестве антидота;
  • внутрь препарат назначается при лечении цистита или уретрита;
  • инъекции синьки медицинской в комплексе с новокаином делаются внутримышечно при хроническом дерматозе.

При введении внутрь, синька медицинская выделяется из организма вместе с мочой, окрашивая ее в ярко синий цвет. Тем самым можно оценить выводящую способность почек и диагностировать возможные патологии.

Как применять препарат?

Синька от стоматита (цена, к слову, данного препарата самая что ни есть демократичная) разрешена к применению взрослым и детям, начиная с рождения.

При таком заболевании, как стоматит, лечение синькой зависит от клинических особенностей, степени тяжести недуга и возраста пациента.

Хронический или лечится путем обрабатывания всей слизистой оболочки рта.

Перед использованием синьки медицинской следует удалить белый налет при помощи тампона, смоченного в , льняном или персиковом масле. После ватный диск смачивают в 1% водном растворе и закладывают в ротовую полость.

Эффективность синьки медицинской проверена годами. Такое антисептическое средство способствует снятию воспаления и предотвращает от повторного заражения. При острой форме курс лечения составляет до 7 дней, а при хронической – до 3 недель. Раствор необходимо применять до полного устранения язвочек.

Лечение стоматита будет иметь положительный результат при условии, что пораженные участки обрабатываются ежедневно.

Взрослым

Перед определением терапевтического курса специалист осматривает ротовую полость и ставит окончательный диагноз. При стоматите назначается комплексная терапия, включающая противовирусные и жаропонижающие препараты, а также обработку синькой медицинской.

Частота обрабатывания ротовой полости лекарственным средством зависит от:

  • тяжести и формы заболевания;
  • состоянии иммунной системы;
  • наличия дополнительных патологий.

При остром стоматите на начальных этапах синькой обрабатывается вся ротовая полость. По мере улучшения состояния препарат следует наносить точечно при помощи ватной палочки. Это поможет избежать появления раздражения слизистой оболочки.

Если передерживаться инструкции при стоматите, метиленовая синька поможет ранкам затянутся на 3-4 день. В качестве дополнения к основному терапевтическому курсу врач может порекомендовать обрабатывать ротовую полость настоями лекарственных трав. Это поможет ускорить процесс заживления язвочек.

Детям

Синька при стоматите у детей назначается только лечащим врачом (стоматологом или педиатром).

Из-за отсутствия способности накопления в крови, она разрешается даже новорожденным детям.

Метиловый синий оказывает эффективное действие только при , который вызывают различные микробы.

В этом случае на повреждения ротовой полости препарат нужно наносить точечно. Обрабатывать пораженные участки детям до 6 лет следует 2 раза в сутки, а старшего возраста – 4 раза.

Одним из часто встречающихся видов стоматита в детском возрасте является герпетический. Но это вирусное заболевание не лечится при помощи синьки медицинской. Поэтому препарат можно использовать в качестве дополнения к основной терапии, которая основывается на приеме противовирусных препаратов. Синька же поможет защитить полость рта от повторного заражения микробами.

При лечении грудничков от стоматита метиленовый синий лучше наносить на соски кормящей мамы, чтобы не травмировать нежную слизистую малыша ватными тампонами.

Прицельное применение в стоматологии

Метиленовый синий в стоматологии выступает в качестве эффективного антивоспалительного средства и антисептика.

Стоматит на губе

Его применяют в случае развития в ротовой полости бактериальной, грибковой или вирусной инфекции. Водным раствором можно обрабатывать как поврежденные участки слизистой оболочки, так и здоровые ткани без риска их повреждения.

Синька при лечении стоматологических заболеваний назначается в зависимости от клинической картины и поставленного врачом диагноза, выделяются следующие схемы лечения:

  • при стоматите производятся точечные прижигания язвочек 1% водным раствором. Таким образом, на поврежденной поверхности образуется защитная пленка, при помощи которой ускоряется регенерация тканей. Частота обработки определяется врачом, она зависит от возраста пациента и стадии заболевания;
  • при пораженные участки слизистой десен смазываются 1% водным раствором;
  • для лечения молочницы синька является незаменимым средством, которое вызывает гибель патогенной микрофлоры и предотвращает повторное возникновение проблемы. Кратность обработки зависит от тяжести процесса.

Возможность побочных действий

Метиловый синий, как и любой лекарственный препарат, имеет противопоказания к применению.

Метиленовая синька не рекомендована к применению в случае:
  • индивидуальной непереносимости или аллергических реакциях на один или нескольких компонентов лекарственного средства;
  • во время беременности или кормления препарат можно использовать только в случае, если польза для матери от использования будет больше, чем возможного вреда малышу;
  • при стоматите у ребенка в возрасте до года, синьку следует наносить осторожно, точечно и только с разрешения врача.

Поскольку попасть в кровь синька не может, то побочные действия могут возникнуть на фоне передозировки или из-за компонентов самого препарата.

Среди возможных системных проявлений выделяются:

  • головная боль;
  • снижение аппетита;
  • кожные аллергические реакции;
  • тошнота или рвота;
  • анемия;
  • нарушения в работе мочеполовой системы;
  • психологический дискомфорт;
  • расстройства со стороны пищеварительной системы.

Специалисты отмечают, что риск возникновения отрицательных реакций увеличивается, если обрабатывать большие участки слизистой оболочки рта.

При появлении побочных действий необходимо сразу прекратить использование препарата. А в случае передозировки препаратом нужно проводить симптоматическое лечение.

Видео по теме

Где купить синьку от стоматита? Здесь все просто: препарат продается практически в каждой аптеке. Также рекомендуем познакомиться с не менее эффективными способами борьбы со стоматитом в домашних условиях:

На основе многолетних наблюдений было замечено, что синька при лечении стоматита дает очень высокие результаты. Благодаря широкому спектру действий средство рекомендовано во всех детских больницах.

Синька от стоматита: способы и особенности применения

Проблемы ротовой полости встречаются у людей достаточно часто. Одна из распространенных неприятностей – появление белых язвочек на слизистой оболочке. Это – стоматит. Бороться с ним нужно в обязательном порядке. А какие методы лечения предлагают врачи? Что такое синька от стоматита? Об этом и о симптомах стоматита будем говорить подробнее.

Стоматит и его симптомы

Название стоматит пришло из греческого языка. Stoma – означает рот. Симптомы этого заболевания могут быть такими:

  • слизистая оболочка отечная, ее покрывает белый или желтый налет;
  • во рту образовываются белые язвочки разного размера;
  • температура тела – высокая, ее тяжело сбить лекарственными препаратами;
  • могут кровоточить десны;
  • появляется ярко-выраженный неприятный запах.

Слабые, единичные проявления стоматита могут пройти сами, примерно за неделю. Но лучше обратиться к врачу, особенно если страдает маленький ребенок.

Методы лечения стоматита

Очень часто врач говорить пациенту, что поможет синька от стоматита. Но что это? Неужели мы говорим о той синьке, которую бабушки добавляли в белую краску при побелке потолков? Конечно же, нет. Это не бытовая синька, а метиленовый синий или йодистый крахмал. Речь идет о сильном антисептике, нейтрализующем патогенные очаги. Синька от стоматита – не единственный препарат, помогающий бороться с заболеванием, но он по праву считается самым действенным.

Кроме синьки могут быть назначены обезболивающие аппликации на язвы, полоскания или антибиотики (при запущенном состоянии).

Особенности медицинской синьки

Метиленовая синька при стоматите применяется уже много лет. Она вырабатывает нерастворимые соединения с белком патогенного организма. Это соединение вызывает гибель вредной микрофлоры, и человек выздоравливает. Следов от язвочек во рту не остается. Лечение стоматита синькой оправдано еще и тем, что препарат совершенно не попадает в кровоток, когда его наносят на слизистую. Значит печень и другие внутренние органы не страдают.

Как применять препарат взрослым

Поскольку при этом заболевании поднимается высокая температура, то врач назначает жаропонижающие средства. Но это не лечение стоматита, а общие меры безопасности для организма. А вот для лечения назначается синька от стоматита. Инструкция к которой указывает, что взрослый пациент должен многократно обрабатывать пораженный участок слизистой оболочки. Обработка производится до 15 раз в сутки. Обратите внимание: обработку полости рта проводят 1% водным раствором. Не спутайте его со спиртовым метиленовым синим.

Наносится синька от стоматита стерильной ваткой или ватной палочкой. Перед нанесением надо аккуратно промокнуть слюну стерильным материалом.

При многократном воздействии язвочки быстро пропадают, но для полного заживления взрослому пациенту необходимо продолжить обработку успокаивающими средствами. Это может быть облепиховое, льняное масло или масляный раствор витамина А.

Как применять синьку для маленьких пациентов

Синька при стоматите у детей применяется иначе, чем у взрослых. Начнем с того, что малышам нельзя так часто обрабатывать язвочки. Это делают 4 раза в день, после еды.

Если стоматит вызван герпесом, то обработку ротовой полости можно проводить до 5 раз. На слизистых оболочках можно использовать только водный раствор.

Для лечения грудничков синька от стоматита наносится на соски кормящей мамы. Так поступают, чтобы не травмировать нежную слизистую младенца бинтом, тампоном или ватной палочкой.

Медицинский эксперимент

В середине двадцатого века в одном из медицинских институтов России был проведен эксперимент. Была выделена группа из 86 детей от полутора до десяти лет. Дети имели выраженные признаки стоматита. 56 человек имели афтозную форму, 13 — язвенную форму, а у 17 пациентов стоматит возник как аллергия на прием медикаментов.

Детки были полностью обследованы, возбудители стоматита – установлены с помощью лабораторных анализов. Все они прошли курс местного лечения метиленовым синим, но в разных формах.

Младшая группа, в которой были детки от полутора лет, спреем на основе йодистого крахмала. Средняя группа, от двух лет, получала лечение в виде аппликаций. Обработка проводилась ежедневно, первый день в медицинском учреждении, далее дома.

Состояние детей на острой стадии стоматита с высокой температурой и увеличенными лимфатическими узлами после лечением метиленовой синькой улучшалось на третий день, а выздоровление наступало на 6-7 день. Дети с легкой стадией стоматита были полностью здоровы уже через трое суток.

Параллельно медики наблюдали группу детей, которым в поликлинике назначили лечение стоматита антибиотиками. Выздоровление малышей наступало на 9-10 день.

Эксперимент доказал, что лечение стоматита синькой дает высокие результаты. «Водный раствор метиленового синего» был рекомендован для назначения в детских поликлиниках и больницах. Однако по какой-то непонятной причине этот препарат так и не получил заслуженной популярности. Молодые родители предпочитают лечить стоматит у детей новомодными средствами. А на недорогие лекарства из молодости своих мам смотрят с недоверием. Лишает препарат популярности еще и тот факт, что его надо изготавливать в специальных аптеках, а новые лекарства можно просто купить в любой аптечной точке. Однако качественный противовирусный, антибактериальный, противогрибковый, противовоспалительный и ранозаживляющий эффект в одном флаконе может предложить только метиловый синий, то есть медицинская синька.

Синька медицинская – инструкция по применению при стоматите у детей и взрослых

Раствор метиленового синего, больше известный в широких массах как синька, является эффективным антисептическим средством.

Он обладает отличным бактерицидным и ранозаживляющим действием, поэтому его часто используют при лечении стоматита в домашних условиях.

Отсутствие спирта в составе исключает вероятность отравлений или ожогов слизистой. При лечении синькой медицинской, инструкция которой подробно описывает показания и противопоказания, следует обратить внимание на возможные побочные действия.

Особенности препарата

Основным действующим компонентом медицинской синьки является метилтиония хлорид. Дополнительным веществом выступает дистиллированная вода.

Механизм действия заключается в способности антисептика соединяться с патогенными бактериями и нейтрализовать их пагубное воздействие. В итоге в полости рта уничтожаются все вредные микробы.

Раствор метиленового синего

Синька от стоматита (отзывы об эффективности препарата довольно впечатляющие) применяется местно на поврежденную кожу (в том числе и слизистую оболочку), и поскольку он не проникает в кровь, то не может вызвать токсические отравления. А значит, печень и другие органы не могут пострадать.

Метиленовая синька при стоматите применяется в виде 1% водного раствора, который не вызывает неприятного ощущения во рту и не приводит к ожогам слизистой.

Из-за ярко синего цвета препарат обладает окрашивающими свойствами. Поэтому синька медицинская применение имеет точечное, и при манипуляциях рекомендуется пользоваться перчатками.

И внутривенно, и наружно

Свойства метиленового синего позволяют использовать его в различных областях медицины наружно и внутривенно. Он представляет собой кристаллический порошок, из которого можно приготовить спиртовой или водный раствор.

Медицинская синька рекомендуется к применению в качестве местного средства в следующих случаях:

  • при различных повреждениях кожного покрова – наружно путем смазывания участков спиртовым раствором;
  • как антисептик для промывания зараженных полостей;
  • при воспалениях слизистых оболочек или кожного покрова;
  • синьку используют при мочеполовых заболеваниях непосредственно для промывания уретры.

Внутривенно медицинская синька назначается:

  • для диагностирования или лечения почечных патологий;
  • при отравлениях сероводородом, угарным газом или цианистыми соединениями синька используется в качестве антидота;
  • внутрь препарат назначается при лечении цистита или уретрита;
  • инъекции синьки медицинской в комплексе с новокаином делаются внутримышечно при хроническом дерматозе.

При введении внутрь, синька медицинская выделяется из организма вместе с мочой, окрашивая ее в ярко синий цвет. Тем самым можно оценить выводящую способность почек и диагностировать возможные патологии.

Как применять препарат?

Синька от стоматита (цена, к слову, данного препарата самая что ни есть демократичная) разрешена к применению взрослым и детям, начиная с рождения.

При таком заболевании, как стоматит, лечение синькой зависит от клинических особенностей, степени тяжести недуга и возраста пациента.

Хронический или острый стоматит лечится путем обрабатывания всей слизистой оболочки рта.

Перед использованием синьки медицинской следует удалить белый налет при помощи тампона, смоченного в облепиховом, льняном или персиковом масле. После ватный диск смачивают в 1% водном растворе и закладывают в ротовую полость.

Эффективность синьки медицинской проверена годами. Такое антисептическое средство способствует снятию воспаления и предотвращает от повторного заражения. При острой форме курс лечения составляет до 7 дней, а при хронической – до 3 недель. Раствор необходимо применять до полного устранения язвочек.

Лечение стоматита будет иметь положительный результат при условии, что пораженные участки обрабатываются ежедневно.

Взрослым

Перед определением терапевтического курса специалист осматривает ротовую полость и ставит окончательный диагноз. При стоматите назначается комплексная терапия, включающая противовирусные и жаропонижающие препараты, а также обработку синькой медицинской.

Частота обрабатывания ротовой полости лекарственным средством зависит от:

  • тяжести и формы заболевания;
  • состоянии иммунной системы;
  • наличия дополнительных патологий.

Так, взрослым пациентам рекомендуется проводить очистку пораженных участков не менее 10-15 раз в сутки.

При остром стоматите на начальных этапах синькой обрабатывается вся ротовая полость. По мере улучшения состояния препарат следует наносить точечно при помощи ватной палочки. Это поможет избежать появления раздражения слизистой оболочки.

Если передерживаться инструкции при стоматите, метиленовая синька поможет ранкам затянутся на 3-4 день. В качестве дополнения к основному терапевтическому курсу врач может порекомендовать обрабатывать ротовую полость настоями лекарственных трав. Это поможет ускорить процесс заживления язвочек.

Детям

Синька при стоматите у детей назначается только лечащим врачом (стоматологом или педиатром).

Из-за отсутствия способности накопления в крови, она разрешается даже новорожденным детям.

Метиловый синий оказывает эффективное действие только при бактериальном стоматите, который вызывают различные микробы.

В этом случае на повреждения ротовой полости препарат нужно наносить точечно. Обрабатывать пораженные участки детям до 6 лет следует 2 раза в сутки, а старшего возраста – 4 раза.

Одним из часто встречающихся видов стоматита в детском возрасте является герпетический. Но это вирусное заболевание не лечится при помощи синьки медицинской. Поэтому препарат можно использовать в качестве дополнения к основной терапии, которая основывается на приеме противовирусных препаратов. Синька же поможет защитить полость рта от повторного заражения микробами.

При лечении грудничков от стоматита метиленовый синий лучше наносить на соски кормящей мамы, чтобы не травмировать нежную слизистую малыша ватными тампонами.

Прицельное применение в стоматологии

Метиленовый синий в стоматологии выступает в качестве эффективного антивоспалительного средства и антисептика.

Стоматит на губе

Его применяют в случае развития в ротовой полости бактериальной, грибковой или вирусной инфекции. Водным раствором можно обрабатывать как поврежденные участки слизистой оболочки, так и здоровые ткани без риска их повреждения.

Синька при лечении стоматологических заболеваний назначается в зависимости от клинической картины и поставленного врачом диагноза, выделяются следующие схемы лечения:

  • при стоматите производятся точечные прижигания язвочек 1% водным раствором. Таким образом, на поврежденной поверхности образуется защитная пленка, при помощи которой ускоряется регенерация тканей. Частота обработки определяется врачом, она зависит от возраста пациента и стадии заболевания;
  • при гингивите пораженные участки слизистой десен смазываются 1% водным раствором;
  • для лечения молочницы синька является незаменимым средством, которое вызывает гибель патогенной микрофлоры и предотвращает повторное возникновение проблемы. Кратность обработки зависит от тяжести процесса.

Возможность побочных действий

Метиловый синий, как и любой лекарственный препарат, имеет противопоказания к применению.

Метиленовая синька не рекомендована к применению в случае:
  • индивидуальной непереносимости или аллергических реакциях на один или нескольких компонентов лекарственного средства;
  • во время беременности или кормления препарат можно использовать только в случае, если польза для матери от использования будет больше, чем возможного вреда малышу;
  • при стоматите у ребенка в возрасте до года, синьку следует наносить осторожно, точечно и только с разрешения врача.

Поскольку попасть в кровь синька не может, то побочные действия могут возникнуть на фоне передозировки или из-за компонентов самого препарата.

Среди возможных системных проявлений выделяются:

  • головная боль;
  • снижение аппетита;
  • кожные аллергические реакции;
  • тошнота или рвота;
  • анемия;
  • нарушения в работе мочеполовой системы;
  • психологический дискомфорт;
  • расстройства со стороны пищеварительной системы.

Специалисты отмечают, что риск возникновения отрицательных реакций увеличивается, если обрабатывать большие участки слизистой оболочки рта.

При появлении побочных действий необходимо сразу прекратить использование препарата. А в случае передозировки препаратом нужно проводить симптоматическое лечение.

Видео по теме

Где купить синьку от стоматита? Здесь все просто: препарат продается практически в каждой аптеке. Также рекомендуем познакомиться с не менее эффективными способами борьбы со стоматитом в домашних условиях:

На основе многолетних наблюдений было замечено, что синька при лечении стоматита дает очень высокие результаты. Благодаря широкому спектру действий средство рекомендовано во всех детских больницах.

Стоматит! Когда это кончится?, — 14756

Всем доброго здоровья!!! Хочу поделится со всеми нашей проблемой и заодно спросить совета.

У моей старшей доци приключился стоматит. Все началось вечером после садика с внезапной температуры 39,1. Я подумала горло, обычно оно дает такую температуру. Дала нурофен, стали применять ингалипт, фарингосепт, септефрил. Температура быстро упала до 36,6. Утром в субботу температура сново 39, нурофеном сбили, продолжаем ингалипт, фарингосепт, септефрил, полость рта смазываем маслом хлорофилипта, все еще думаем горло.

 

В воскресенье ребенок жалуется на десенки, губы потрескались, а еще привычка царапать губы во сне, температура 39, сбивается нурофеном и через 6-7 часов сново поднимается, отказываемся от еды, много пьем. Ночью спали плохо, а утром в понедельник жалобы, что болит язык, с температурой ситуация стабильна — 39. Еще показалось что опухло под нижними челюстями, мне уже «свинка» привиделась. Вызвали врача. Позвонили в сад сообщить что заболели, а там у одногруппника скарлатина. Я ели дождалась врача. Оказалось СТОМАТИТ! Назначили Стоматодин, синьку, септефрил, полоскания. Почитала спецвыпуск «Здоровье малыша» журнала Твой малыш — там пишут и о облепиховом масле. Второй день лечимся так: полоскание раствором вода+спиртовый хлорофилипт, смазываем полость рта, язык, десенки, губы синькой, через время губы смазываю облепиховым маслом, через время опять полощим, все смазываем облепиховым маслом, полощим стоматодином, через время мажу губы облепиховым маслом и т.д. Температура отпустила, нурофен приняли последний раз вчера вечером, на утро температуры нет, вот только к обеду поднялась 37 — буду наблюдать. Раны на губах стали кровоточить при движении, конечно синька спиртовая, сушит, все время мажу облепих. маслом. Может есть спец. мазь какая-то что б заживала кожа?  Ребенка жалко, капризная, ест плохо даже жиденькое, хорошо хоть пьет. Даю компот — смородина сырая перетертая с сахаром и такая же малина + лимон — развожу ели теплой кипяченой водой. Потом сразу же полошим рот, мажем губы.

Девочки поделитесь опытом, особенно беспокоят губки…

Спасибо!

Орасепт при стоматите у ребенка и взрослого

«Орасепт» — антисептик с выраженным обезболивающим эффектом. Активным ингредиентом выступает фенол, наделенный противомикробным и фунгицидным эффектом. Для смягчения слизистой оболочки применяется вспомогательный компонент — глицерин. Благодаря такому комплексному воздействию на слизистую ротовой полости, «Орасепт» часто назначается при стоматите. Из-за отсутствия склонности к адсорбции в кровоток, препарат разрешен к использованию у детей (с 2-х лет) и беременных.

“Орасепт” – спрей для устранения язвенных поражений слизистой рта.

Описание

«Орасепт» — жидкий антисептик темно-малинового цвета с приятным вишневым послевкусием. Выпускается в аэрозольной форме для многократного применения. Отпускается в аптеках без рецепта и содержится в среднем по величине флаконе (емкостью 177 мл), оснащенным специальным распыляющим устройством.

Основные действующие ингредиенты:

  • фенол, отвечающий за бактерицидный, противогрибковое, фунгицидный эффект;
  • глицерин, отвечающий за смягчающее действие, чем предупреждается раздражение слизистой оболочки.

«Орасепт» широко применяется в стоматологической и ЛОР-практике, в том числе, для лечения стоматита. Компоненты препарата не всасываются в системный кровоток, поэтому действие распространяется только на обрабатываемые участки. Следовательно, препарат может быть назначен малыша с единственным условием — достижение ими 2-летнего возраста. Если лечить ребенка аэрозолем, повышается риск развития спазма гортани. «Орасепт» можно использовать для лечения стоматита у беременных и кормящих матерей.

Вернуться к оглавлению

Преимущества

Аэрозоль наделен массой положительных свойств:

  • быстро снимает раздражение;
  • оказывает мгновенный обезболивающий эффект;
  • снимает отек гортани;
  • эффективно уничтожает бактерии, грибки и прочие патогены.

Удобная форма спрея и небольшая емкость позволяет использовать его в любое удобное время. Несмотря на стойкий вкус и цвет, препарат не вредит зубной эмали.

Вернуться к оглавлению

Применение

Длительность лечения и дозировки корректируются лечащим врачом. Важно своевременно начать антивирусное лечение, в противном случае, через 2—3 суток, как начался стоматит, «Орасепт» не будет столь эффективен в качестве самостоятельного лечебного средства.

Стандартный курс лечения длится 5 суток. Даже при прекращении болей, частичном снятии воспаления, прекращать применение не следует, так как целебный эффект будет утрачен.

Стандартные дозировки:

  • взрослые и дети от 12 лет — по 4—5 распылений каждые 4 часа;
  • малыши от 2 до 12 лет — по 3 с тем же временным промежутком.

По мере лечения врач оценивает динамику течения недуга, изучает результаты бакпосева мазка из зева. За доктором сохраняется право корректировать кратность и частоту впрысков аэрозоля.

При отсутствии лечебного эффекта в течение первых 5 суток от начала лечения спреем пациенту назначаются дополнительные диагностические процедуры с целью выявления истинного возбудителя инфекции. Изменяется тактика и схема терапии.

Вернуться к оглавлению

Противопоказания, побочные эффекты

Следует воздержаться от лечения “Орасептом” матерям, беременным, детям до 2-х лет, хоть и препарат почти не имеет побочных эффектов.

«Орасепт» не рекомендован, если имеется сверхчувствительность к его ингредиентам. С осторожностью следует назначать спрей:

  • ребенку до 2-х лет из-за риска развития спазма гортани;
  • беременным;
  • матерям в период лактации;
  • пациентам с выраженной дисфункцией печени/почек.

Медпрепарат хорошо переносится, но в единичных случаях возможно развитие гиперемии и отечности слизистой ротовой полости, появление кожных проявлений аллергии.

Вернуться к оглавлению

Аналоги

Аналогичными лекарственными средствами по фармакологическому действию выступают: «Стрепсилс», «Фармасептик», «Фалиминт».

Вернуться к оглавлению

Отзывы врачей

Стоматологии рекомендуют «Орасепт» при лечении стоматита у малышей, взрослых и беременных. Они относят его к одному из лучших антисептиков современности. Препарат эффективно снимает воспаление и симптомы, борется с патогенными возбудителями, устраняя причину болезни. Благодаря комплексному воздействию риск рецидивов стоматита минимален.

В случае отсутствия эффекта от применения средства (что маловероятно) рекомендуется пройти дополнительное обследование для уточнения первопричины, которая, возможно, кроется в сопутствующей внутренней патологии.

ОБРАЩАЕМ ВНИМАНИЕ! Это домашнее средство поможет ВСЕМ, кому надоело страдать ОТ ГЕРПЕСА. Действует быстро и натурально, без уколов и операций! что же за средство >>

ЭТО действительно ВАЖНО! Прямо сейчас можно узнать дешевый способ избавится от герпеса… УЗНАТЬ >>

А вы знали? Герпес очень опасен — доказано что эти безобидные высыпания провоцируют рак! Мало кто знает, но избавиться от него очень просто — возьмите читать далее…

ВАЖНО ЗНАТЬ! Даже ‘запущенный’ герпес можно вылечить дома, без операций и уколов. Просто прочитайте что сделала Ольга Самарская читать далее…

Эффективное средство от герпеса существует. Перейдите по ссылке и узнайте как Ольга Самарская вылечила себя от генитального герпеса за 3 дня!

Генетические и иммунологические данные у детей с рецидивирующим афтозным стоматитом с системным воспалением | Детская ревматология

  • Томас К.Т., Федер Х.М. младший, Лоутон А.Р., Эдвардс К.М. Синдром периодической лихорадки у детей. J Педиатр. 1999; 135:15–21.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Гатторно М., Каорси Р., Мейни А., Катталини М., Федеричи С., Зулиан Ф. и др. Дифференциация синдрома пфапа от моногенных периодических лихорадок.Педиатрия. 2009;124:e721–8.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Тер Хаар Н.М., Джеяратнам Дж., Лахманн Х.Дж., Саймон А., Броган П.А., Доглио М. и др. Фенотип и генотип дефицита мевалонаткиназы: серия из 114 случаев из регистра евролихорадки. Артрит Ревматолог. 2016;68:2795–805.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Коне-Паут И.Болезнь Бехчета у детей, обзор. Pediatr Rheumatol Online J. 2016;14:10.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Ланкарани К.Б., Сивандзаде Г.Р., Хассанпур С. Оральные проявления воспалительного заболевания кишечника: обзор. Мир J Гастроэнтерол. 2013;19:8571–9.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Чивченгчол Д., Мерфи Р., Эдвардс С.В., Бересфорд М.В.Слизисто-кожные проявления при ювенильной системной красной волчанке: обзор литературы. Pediatr Rheumatol Online J. 2015; 13:1.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Wolach B, Scharf Y, Gavrieli R, de Boer M, Roos D. Необычно позднее проявление Х-сцепленного хронического гранулематозного заболевания у взрослой женщины с соматической мозаикой новой мутации в cybb. Кровь. 2005; 105: 61–6.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Эрдос М., Якобич Э., Солтеш Б., Тот Б., Бата-Чорго З., Мароди Л.Рецидивирующий тяжелый афтозный стоматит и язвы слизистой оболочки как первичные проявления новой мутации stat1 с усилением функции. Фронт Иммунол. 2020;11:967.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Пфайфер Л., Маир Н.К., Хименес-Эредиа Р., Генель Ф., Гулез Н., Ардениз О. и др. Мутации, влияющие на регулятор актина wd, содержащий повторы белка 1, приводят к аберрантному лимфоидному иммунитету. J Аллергия Клин Иммунол.2018;142:1589–604 e11.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Feske S, Gwack Y, Prakriya M, Srikanth S, Puppel SH, Tanasa B, et al. Мутация orai1 вызывает иммунную недостаточность, нарушая функцию crac-канала. Природа. 2006; 441:179–85.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Huck K, Feyen O, Niehues T, Ruschendorf F, Hubner N, Laws HJ, et al.У девочек, гомозиготных по IL-2-индуцируемой мутации Т-клеточной киназы, которая приводит к дефициту белка, развивается фатальная EBV-ассоциированная лимфопролиферация. Джей Клин Инвест. 2009; 119:1350–8.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Sorte HS, Osnes LT, Fevang B, Aukrust P, Erichsen HC, Backe PH, et al. Потенциальный вариант-основатель carmil2/rltpr в трех норвежских семьях с бородавками, контагиозным моллюском и дисфункцией Т-клеток.Мол Генет Геномик Мед. 2016; 4: 604–616.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Лалауи Н., Бойден С.Е., Ода Х., Вуд Г.М., Стоун Д.Л., Чау Д. и др. Мутации, которые предотвращают расщепление ripk1 каспазой, вызывают аутовоспалительное заболевание. Природа. 2020; 577: 103–8.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Zhou Q, Wang H, Schwartz DM, Stoffels M, Park YH, Zhang Y и др.Мутации с потерей функции в tnfaip3, приводящие к гаплонедостаточности a20, вызывают раннее начало аутовоспалительного заболевания. Нат Жене. 2016;48:67–73.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Papadopoulou C, Omoyinmi E, Standing A, Pain CE, Booth C, D’Arco F и др. Моногенные имитаторы болезни Бехчета у молодых. Ревматология (Оксфорд). 2019;58:1227–38.

    КАС Статья Google ученый

  • Демиркая Э., Шахин С., Романо М., Чжоу Ц., Аксентиевич И.Новые горизонты в генетической этиологии системной красной волчанки и волчаночноподобных заболеваний: моногенная волчанка и не только. Дж. Клин Мед. 2020;9.

  • Райс Г.И., Родеро М.П., ​​Кроу Ю.Дж. Фенотипы болезней человека, связанные с мутациями в trex1. Дж. Клин Иммунол. 2015;35:235–43.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Тирош И., Спилман С., Барел О., Рам Р., Штаубер Т., Парет Г. и др. Секвенирование всего экзома при волчанке с дебютом в детском возрасте часто выявляет этиологию одного гена.Pediatr Rheumatol Online J. 2019; 17:52.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Калевисте Э., Сааре М., Лихи Т.Р., Бонде В., Даффи Д., Могенсен Т.Х. и др. Сигнатура интерферона у пациентов с мутацией, связанной с усилением функции stat1, определяется эпигенетически. Евр Дж Иммунол. 2019;49:790–800.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Schwartz DM, Blackstone SA, Sampaio-Moura N, Rosenzweig S, Burma AM, Stone D, et al.Сигнатура интерферона I типа предсказывает ответ на ингибирование jak при гаплонедостаточности а20. Энн Реум Дис. 2020; 79: 429–31.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Zimmermann N, Wolf C, Schwenke R, Luth A, Schmidt F, Engel K, et al. Оценка клинического ответа на ингибирование янус-киназы у пациентов с семейной обмороженной волчанкой и мутацией trex1. ДЖАМА Дерматол. 2019;155:342–6.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Пуччетти А., Фиоре П.Ф., Пелоси А., Тинацци Э., Патуццо Г., Аргентино Г. и др.Профилирование экспрессии генов при болезни Бехчета указывает на аутоиммунный компонент в патогенезе заболевания и открывает новые возможности для таргетной терапии. Дж. Иммунол Рез. 2018;2018:4246965.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Коне-Паут И., Шахрам Ф., Дарсе-Белло М., Кантарини Л., Чимаз Р., Гатторно М. и др. Согласованные критерии классификации болезни Бехчета у детей из проспективной наблюдательной когорты: Pedbd.Энн Реум Дис. 2016;75:958–64.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Хохберг МЦ. Обновление американского колледжа ревматологов пересмотрело критерии классификации системной красной волчанки. Ревмирующий артрит. 1997;40:1725.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Арингер М., Костенбадер К., Дайх Д., Бринкс Р., Моска М., Рэмси-Голдман Р. и др.Критерии классификации системной красной волчанки Европейской лиги по борьбе с ревматизмом/Американского колледжа ревматологов, 2019 г. Энн Реум Дис. 2019;78:1151–9.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Pin A, Monasta L, Taddio A, Piscianz E, Tommasini A, Tesser A. Простая и надежная стратегия проведения анализа сигнатур интерферона типа i, сопоставимого между исследовательскими центрами. Диагностика (Базель). 2019;9.

  • Райс Г.И., Форте Г.М., Шинкевич М., Чейз Д.С., Эби А., Абдель-Хамид М.С. и др. Оценка связанных с интерфероном биомаркеров при синдроме Айкарди-Гутьерес, связанном с мутациями в trex1, rnaseh3a, rnaseh3b, rnaseh3c, samhd1 и adar: исследование случай-контроль. Ланцет Нейрол. 2013;12:1159–69.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Аджубей И.А., Шмидт С., Пешкин Л., Раменский В.Е., Герасимова А., Борк П. и др.Метод и сервер для прогнозирования повреждающих миссенс-мутаций. Нат Методы. 2010;7:248–9.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Кумар П., Хеникофф С., Нг ПК. Прогнозирование влияния кодирования несинонимичных вариантов на функцию белка с использованием алгоритма SIFT. Нат Проток. 2009;4:1073–81.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Чун С., Фэй Дж.С.Выявление вредных мутаций в трех геномах человека. Геном Res. 2009;19:1553–61.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Schwarz JM, Rödelsperger C, Schuelke M, Seelow D. MutationTaster оценивает болезнетворный потенциал изменений последовательности. Нат Методы. 2010;7:575–6.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Кирхер М., Виттен Д.М., Джейн П., О’Роак Б.Дж., Купер Г.М., Шендур Дж.Общая основа для оценки относительной патогенности генетических вариантов человека. Нат Жене. 2014;46:310–5.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Cooper GM, Goode DL, Ng SB, Sidow A, Bamshad MJ, Shendure J, et al. Оценки эволюционных ограничений по одному нуклеотиду подчеркивают болезнетворные мутации. Нат Методы. 2010;7:250–1.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Карбонелла А., Манкано Г., Гремесе Э., Алкурая Ф.С., Патель Н., Гурьери Ф. и др.Аутосомно-рецессивное аутоиммунное заболевание, связанное с ДНКазой113, с необычной клинической картиной, имитирующей системную красную волчанку. волчанка. 2017; 26: 768–72.

  • Йоханнес Хартл, Роберт М. Клэнси, Питер М. Измирли2, Х. Майкл Бельмонт1, Николь Кайден3, Николь Борнкамп и др. Дисфункция пути DNAS E1L3 и накопление антигена при волчаночном нефрите [аннотация]. Ежегодное собрание ACR/ARHP 2018 г.

  • Liu L, Okada S, Kong XF, Kreins AY, Cypowyj S, Abhyankar A, et al.Мутации stat1 человека с усилением функции нарушают иммунитет к IL-17 и лежат в основе хронического кожно-слизистого кандидоза. J Эксперт Мед. 2011; 208:1635–48.

  • Giovannozzi S, Lemmens V, Hendrix J, Gijsbers R, Schrijvers R. Визуализация живых клеток демонстрирует несколько путей к фенотипу с приобретением функции stat1. Фронт Иммунол. 2020;11:1114.

  • Hofer M, Pillet P, Cochard MM, Berg S, Krol P, Kone-Paut I, et al. Международная периодическая лихорадка, афтозный стоматит, фарингит, когорта синдрома шейного аденита: описание различных фенотипов у 301 пациента.Ревматология (Оксфорд). 2014;53:1125–9.

    Артикул Google ученый

  • Бату ЭД. Периодическая лихорадка, афтозный стоматит, фарингит и синдром шейного аденита (пфапа): основные черты и алгоритм для клинической практики. Ревматол Интерн. 2019; 39: 957–70.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Де Пьери С., Таддио А., Инсалако А., Барби Э., Лепор Л., Вентура А. и др.Различные проявления дефицита мевалонаткиназы: серия случаев. Клин Эксперт Ревматол. 2015; 33: 437–42.

    ПабМед Google ученый

  • Pehlivan E, Adrovic A, Sahin S, Barut K, Kul Cinar O, Kasapcopur O. Синдром Пфапа у населения с эндемической семейной средиземноморской лихорадкой. J Педиатр. 2018;192:253–5.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Кантарини Л., Витале А., Берсани Г., Ньевес Л.М., Катталини М., Лопалко Г. и др.Синдром Пфапа и болезнь Бехчета: сравнение двух медицинских образований на основе клинических интервью, проведенных тремя разными специалистами. Клин Ревматол. 2016;35:501–5.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Гуркан А., Озлу С.Г., Алтыайлик-Озер П., Куртул Б.Е., Каракан С.Д., Сенел С. Рецидивирующий афтозный стоматит в детском и подростковом возрасте: моноцентровый опыт. Педиатр Дерматол. 2015; 32: 476–80.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Li G, Li Y, Liu H, Shi Y, Guan W, Zhang T и др.Генетическая гетерогенность детской системной красной волчанки с лимфопролиферацией. Медицина (Балтимор). 2020;99:e20232.

    КАС Статья Google ученый

  • Ситинг Р.Р., Кауфман К.А., Ватанакунакорн К. Глубокая грибковая инфекция при системной красной волчанке – зарегистрировано три случая, обзор литературы. J Ревматол. 1975; 2: 61–72.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Вассерман А.М., Сарантопулос Г.П., Ханна Д.Грибковый лейкоцитокластический васкулит как проявление системного васкулита у больного системной красной волчанкой. Дж. Клин Ревматол. 2009;15:383–6.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Chen GL, Chen Y, Zhu CQ, Yang CD, Ye S. Инвазивная грибковая инфекция у китайских пациентов с системной красной волчанкой. Клин Ревматол. 2012;31:1087–91.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Фэнгтам М., Магдер Л.С., Петри М.А.Кандидоз полости рта при системной красной волчанке. волчанка. 2014;23:684–90.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Сильва М.Ф., Ферриани М.П., ​​Террери М.Т., Перейра Р.М., Магальяйнс С.С., Бонфа Э. и др. Многоцентровое исследование инвазивных грибковых инфекций у пациентов с системной красной волчанкой в ​​детском возрасте. J Ревматол. 2015;42:2296–303.

    КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Чоудри И.А., Тан И.Дж., Миан Н., Маккей М., Кейзер Х., Дэвидсон А.Системная красная волчанка с признаками, свидетельствующими о заражении вирусом иммунодефицита человека. J Ревматол. 2005; 32:1365–8.

  • Фебронио М.В., Перейра Р.М.Р., Бонфа Э., Такиути А.Д., Перейра Е.А.Г., Сильва ССА. Воспалительная цервиковагинальная цитология связана с активностью заболевания при ювенильной системной красной волчанке. Волчанка.2007;16:430–5.

  • Цутида Н., Кирино Ю., Соэдзима Ю., Онодера М., Араи К., Тамура Э. и др. Гаплонедостаточность а20, вызванная новым нонсенс-вариантом или полной делецией гена tnfaip3, клинически отличается от болезни Бехчета.Артрит Res Ther. 2019;21:137.

  • Baechler EC, Batliwalla FM, Karypis G, Gaffney PM, Ortmann WA, Espe KJ, et al. Сигнатура интерферон-индуцируемой экспрессии генов в клетках периферической крови пациентов с тяжелой волчанкой. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003;100:2610–5.

  • Эшлиманн Ф.А., Бату Э.Д., Канна С.В., Го Э., Гул А., Хоффманн П. и др. Гаплонедостаточность A20 (ha20): клинические фенотипы и течение заболевания у пациентов с недавно выявленным nf-kb-опосредованным аутовоспалительным заболеванием.Энн Реум Дис. 2018;77:728–35.

  • Флинт С.М., Йованович В., Тео Б.В., Мак А., Тумбу Дж., МакКинни Э.Ф. и др. Сигнатуры интерферона типа 1, специфичные для субпопуляции лейкоцитов, при красной волчанке и других иммуноопосредованных заболеваниях. РМД открыт. 2016;2:e000183.

  • Бахрами Т., Валилоу С.Ф., Садр М., Солтани С., Салманинежад А., Солтанинежад Э. и др. Полиморфизм гена Ptpn22 при системной красной волчанке у детей. Фетальный педиатр патол. 2020; 39:13–20.

  • Тизауи К., Ким С.Х., Чон Г.Х., Кронбихлер А., Ли К.С., Ли К.Х. и др.Ассоциация полиморфизма ptpn22 1858c/t с аутоиммунными заболеваниями: систематический обзор и байесовский подход. Дж. Клин Мед. 2019;8.

  • Batu ED, Kosukcu C, Taskiran E, Sahin S, Akman S, Sozeri B, et al. Секвенирование полного экзома при системной красной волчанке с ранним началом. J Ревматол. 2018;45:1671–9.

  • Аль-Майуф С.М., Санкер А., Абдвани Р., Абрави С.А., Альмуршеди Ф., Альхашми Н. и др. Вариант с потерей функции ДНКазы 113 вызывает семейную форму системной красной волчанки.Нат Жене. 2011;43:1186–8.

  • Ozcakar ZB, Foster J 2nd, Diaz-Horta O, Kasapcopur O, Fan YS, Yalcinkaya F, et al. Мутации ДНКазы1l3 при синдроме гипокомплементемического уртикарного васкулита. Ревмирующий артрит. 2013;65:2183–9.

  • Анализ генетической основы периодической лихорадки с синдромом афтозного стоматита, фарингита и шейного аденита (PFAPA)

  • Touitou, I. & Kone-Paut, I. Аутовоспалительные заболевания. Лучшая практика. Рез. клин. Ревматол.22, 811–829 (2008).

    КАС пабмед Google ученый

  • Martinon, F., Petrilli, V., Mayor, A., Tardivel, A. & Tschopp, J. Кристаллы мочевой кислоты, связанные с подагрой, активируют инфламмасому NALP3. Природа 440, 237–241 (2006).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед Google ученый

  • Мастерс С.Л., Саймон А., Аксентьевич И. и Кастнер Д.Л. Аутовоспалительный ужас: молекулярная патофизиология аутовоспалительного заболевания (*).Анну. Преподобный Иммунол. 27, 621–668 (2009).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Маршалл Г.С., Эдвардс К.М., Батлер Дж. и Лоутон А.Р. Синдром периодической лихорадки, фарингита и афтозного стоматита. Дж. Педиатр. 110, 43–46 (1987).

    КАС пабмед Google ученый

  • Padeh, S. et al. Периодическая лихорадка, афтозный стоматит, фарингит и аденопатический синдром: клиника и исход.Дж. Педиатр. 135, 98–101 (1999).

    КАС пабмед Google ученый

  • Padeh, S., Stoffman, N. & Berkun, Y. Периодическая лихорадка, сопровождающаяся афтозным стоматитом, фарингитом и синдромом шейного аденита (синдром PFAPA) у взрослых. Изр. Мед. доц. Журнал 10, 358–360 (2008).

    ПабМед Google ученый

  • Кантарини Л., Витале А., Галеацци М. и Фредиани Б.Случай резистентной периодической лихорадки у взрослых, афтозного стоматита, фарингита и синдрома шейного аденита (PFAPA), поддающихся лечению анакинрой. клин. Эксп. Ревматол. 30, 593 (2012).

    ПабМед Google ученый

  • Колотто, М. и др. Синдром PFAPA у молодого человека с тонзиллэктомией в анамнезе. Стажер Мед. 50, 223–225 (2011).

    ПабМед Google ученый

  • Каццато, М., Neri, R., Possemato, N., Puccini, R. & Bombardieri, S. Случай периодической лихорадки у взрослых, афтозного стоматита, фарингита и синдрома цервикального аденита (PFAPA), связанного с эндокапиллярным пролиферативным гломерулонефритом. клин. Ревматол. 32 (Приложение 1) 33–36 (2013).

    Google ученый

  • Стоянов С. и др. Периодическая лихорадка, афтозный стоматит, фарингит и аденит (ПФАПА) — нарушение врожденного иммунитета и активация Th2 в ответ на блокаду IL-1.проц. Натл. акад. науч. США 108, 7148–7153 (2011).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед Google ученый

  • Колли, Л. и др. Периодическая лихорадка, афтозный стоматит, фарингит, синдром шейного аденита связаны с нарушением регуляции моноцитарной продукции ИЛ-1бета. Дж. Аллергия Клин. Иммунол. 131, 1635–1643 (2013).

    КАС пабмед Google ученый

  • Хофер, М., Малауи, Н.& Prieur, A.M. Ребенок с системным лихорадочным заболеванием — дифференциальная диагностика и лечение. Лучшая практика. Рез. клин. Ревматол. 20, 627–640 (2006).

    ПабМед Google ученый

  • Акелма, А. З. и др. Является ли синдром PFAPA действительно спорадическим заболеванием или это генетическое заболевание? Мед. Гипотезы 81, 279–281 (2013).

    ПабМед Google ученый

  • Сампайо, И. К., Rodrigo, MJ & Monteiro Marques, JG. Два брата и сестры с периодической лихорадкой, афтозным стоматитом, фарингитом, синдромом аденита (PFAPA). Журнал детских инфекционных заболеваний 28, 254–255 (2009).

    ПабМед Google ученый

  • Валенсуэла, П. М., Майерсон, Д., Тапиа, Дж. Л. и Талесник, Э. Синдром периодической лихорадки, афтозного стоматита, фарингита и аденита (PFAPA) у братьев и сестер. клин. Ревматол. 28, 1235–1237 (2009).

    ПабМед Google ученый

  • Cochard, M. et al. Синдром PFAPA не является спорадическим заболеванием. Ревматология 49, 1984–1987 (2010).

    ПабМед Google ученый

  • Даган Э., Гершони-Барух Р., Хатиб И., Мори А. и Брик Р. Анализ мутаций MEFV, TNF1rA, CARD15 и NLRP3 в PFAPA. Ревматол. Междунар. 30, 633–636 (2010).

    КАС пабмед Google ученый

  • Ковач Л.и другие. Повышенный уровень иммуноглобулина D у детей с синдромом PFAPA. Нейро. Эндокринол. лат. 31, 743–746 (2010).

    КАС пабмед Google ученый

  • Гатторно, М. и др. Дифференциация синдрома PFAPA от моногенных периодических лихорадок. Педиатрия 124, e721–728 (2009).

    ПабМед Google ученый

  • Топлак, Н. и др. Международный регистр аутовоспалительных заболеваний: опыт Eurofever.Анналы ревматических заболеваний 71, 1177–1182 (2012).

    ПабМед Google ученый

  • Танючи С. и др. Варианты MEFV у пациентов с синдромом PFAPA в Японии. Откройте Ревматол. 2013. Т. 7. С. 22–25.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Aganna, E. et al. Ассоциация мутаций в гене NALP3/CIAS1/PYPAF1 с широким фенотипом, включая рецидивирующую лихорадку, чувствительность к холоду, нейросенсорную глухоту и АА-амилоидоз.Ревмирующий артрит. 46, 2445–2452 (2002).

    КАС пабмед Google ученый

  • Порксен, Г. и др. Периодическая лихорадка, легкие артралгии и обратимое умеренное и тяжелое воспаление органов, связанное с мутацией V198M в гене CIAS1, у трех немецких пациентов — расширяющийся фенотип аутовоспалительного синдрома, связанного с CIAS1. Евро. Дж. Гематол. 73, 123–127 (2004).

    ПабМед Google ученый

  • Лок, Дж.и другие. Генетическая предрасположенность (мутация NLRP3 V198M) к опосредованному IL-1 воспалению у пациента с синдромом Шницлера. Журнал аллергии и клинической иммунологии 125, 500–502 (2010).

    КАС пабмед Google ученый

  • Rowczenio, D.M. et al. Клинические характеристики у субъектов с NLRP3 V198M, диагностированным в одном центре Великобритании, и обзор литературы. Артрит Рез. тер. 15, С. 30 (2013).

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Бенс С.и другие. SPAG7 является геном-кандидатом синдрома периодической лихорадки, афтозного стоматита, фарингита и аденопатии (PFAPA). Гены. Иммун. 15, 190–194 (2014).

    КАС пабмед Google ученый

  • Fuentes Fajardo, K.V. et al. Обнаружение ложноположительных сигналов при секвенировании экзома. Мутация человека 33, 609–613 (2012).

    КАС пабмед Google ученый

  • Musumeci, L.и другие. Различия в одиночных нуклеотидах (SND) в базе данных dbSNP могут привести к ошибкам в исследованиях генотипирования и гаплотипирования. Гум. Мутат. 31, 67–73 (2010).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Хоффман, Х. М., Мюллер, Дж. Л., Бройд, Д. Х., Вандерер, А. А. и Колоднер, Р. Д. Мутация нового гена, кодирующего предполагаемый пирин-подобный белок, вызывает семейный простудный аутовоспалительный синдром и синдром Макла-Уэллса.Генетика природы 29, 301–305 (2001).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Pelagatti, M. A. et al. Долгосрочный клинический профиль детей с низкопенетрантной мутацией R92Q гена TNFRSF1A. Ревмирующий артрит. 63, 1141–1150 (2011).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Туиту И., Перес К., Дюмон Б., Federici, L. & Jorgensen, C. Рефрактерный аутовоспалительный синдром, связанный с дигенной передачей периодического синдрома, связанного с рецептором фактора некроза опухоли с низкой пенетрантностью, и периодического синдрома, связанного с криопирином. Анналы ревматических заболеваний 65, 1530–1531 (2006).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Jeru, I. et al. Идентификация и функциональные последствия рецидивирующей миссенс-мутации NLRP12 при синдромах периодической лихорадки.Ревмирующий артрит. 63, 1459–1464 (2011).

    КАС пабмед Google ученый

  • Verma, D. et al. Полиморфизм Q705K в NLRP3 представляет собой изменение с усилением функции, ведущее к избыточной продукции интерлейкина-1бета и IL-18. PloS one 7, e34977 (2012).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Туиту, И. и др. Infevers: развивающаяся база данных мутаций для аутовоспалительных синдромов.Мутация человека 24, 194–198 (2004).

    КАС пабмед Google ученый

  • Замбетти, Л. П., Лаудизи, Ф., Ликандро, Г., Риччарди-Кастаньоли, П. и Мортелларо, А. Рапсодия НЛРП: мастера воспаления и многое другое. Иммунол. Рез. 53, 78–90 (2012).

    КАС пабмед Google ученый

  • Корреа, Р. Г., Милутинович, С. и Рид, Дж.C. Роли NOD1 (NLRC1) и NOD2 (NLRC2) во врожденном иммунитете и воспалительных заболеваниях. Отчеты о биологических науках 32, 597–608 (2012).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Schroder, K. & Tschopp, J. Инфламмасомы. Ячейка 140, 821–832 (2010).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Anderson, J. P. et al. Структурный, экспрессионный и эволюционный анализ мышиного CIAS1.Ген. 338, 25–34 (2004).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Levandowski, C.B. et al. Гаплотипы NLRP1, связанные с витилиго и аутоиммунитетом, усиливают процессинг интерлейкина-1бета через инфламмасому NLRP1. Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки 110, 2952–2956 (2013).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Мастерс, С.Л. и др. Активация инфламмасомы NLRP1 вызывает пироптоз гемопоэтических клеток-предшественников. Иммунитет 37, 1009–1023 (2012).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Proell, M., Riedl, SJ, Fritz, JH, Rojas, AM & Schwarzenbacher, R. Семейство Nod-подобных рецепторов (NLR): рассказ о сходствах и различиях. PloS one 3, e2119 (2008 г.).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Альбрехт М., Домингес, Ф.С., Шрайбер, С. и Ленгауэр, Т. Структурная локализация вариаций последовательности, связанных с заболеванием, в доменах NACHT и LRR PYPAF1 и NOD2. ФЭБС лат. 554, 520–528 (2003).

    КАС пабмед Google ученый

  • Аксентьевич И. и др. Клинический континуум криопиринопатий: новые мутации CIAS1 у пациентов из Северной Америки и новая модель криопирина. Ревмирующий артрит. 56, 1273–1285 (2007).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Кацанис Н.и другие. Триаллельное наследование при синдроме Барде-Бидля, менделевском рецессивном заболевании. Наука 293, 2256–2259 (2001).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед Google ученый

  • Эйхерс, Э. Р., Льюис, Р. А., Кацанис, Н. и Лупски, Дж. Р. Триаллельное наследование: мост между менделевскими и многофакторными признаками. Анна. Мед. 36, 262–272 (2004).

    КАС пабмед Google ученый

  • Дэвис, Э.Э. и Катсанис, Н. Цилиопатии: переходная модель в системную биологию генетических заболеваний человека. Курс. мнение Жене. Дев. 22, 290–303 (2012).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Томас К.Т., Федер Х.М. младший, Лоутон А.Р. и Эдвардс К.М. Синдром периодической лихорадки у детей. Журнал педиатрии 135, 15–21 (1999).

    КАС пабмед Google ученый

  • Фирманн, М.и другие. Исследование CoLaus: популяционное исследование для изучения эпидемиологии и генетических детерминант сердечно-сосудистых факторов риска и метаболического синдрома. BMC Cardiovasc. Беспорядок. 8, 6 (2008).

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Брикелл, П. М. Иммортализация В-лимфоцитов человека вирусом Эпштейна-Барр. Методы молекулярной биологии 8, 213–218 (1992).

    КАС пабмед Google ученый

  • ДеПристо, М.А. и др. Основа для обнаружения вариаций и генотипирования с использованием данных секвенирования ДНК следующего поколения. Генетика природы 43, 491–498 (2011).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Ван, К., Ли, М. и Хаконарсон, Х. ANNOVAR: функциональная аннотация генетических вариантов на основе данных высокопроизводительного секвенирования. Исследование нуклеиновых кислот 38, e164 (2010).

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Педиатрическая диагностика уха, носа и горла

    В Детской больнице Колорадо наши специалисты-отоларингологи (уха, горла и носа) оказывают всестороннюю помощь детям в районе Скалистых гор и за его пределами.Каждый год мы наблюдаем более 18 000 пациентов с такими заболеваниями, как потеря слуха и нарушения сна.

    35 Детские ЛОР-врачи

    125 Годы совместной педиатрической практики после окончания стажировки

    18 000+ Посещений пациентов ежегодно

     

    Наша команда является одной из крупнейших групп детских отоларингологов, прошедших стажировку в западной части Соединенных Штатов.Специалисты также являются преподавателями кафедры отоларингологии Медицинской школы Университета Колорадо.

    Чтобы предоставить вашему ребенку наиболее полный уход, отделение сотрудничает с другими службами Children’s Colorado, такими как аудиология, речевая патология и службы обучения, легочная медицина, аллергология, иммунология, педиатрическая медицина и хирургия.

    Услуги отоларинголога (ЛОР), которые мы предоставляем

    Помимо предоставления обычных детских ЛОР-клиник, наши преподаватели и сотрудники проводят междисциплинарные клиники по синуситам, небно-глоточной недостаточности (ВПИ), микротии, нарушениям голоса, нарушениям равновесия, тугоухости, резонансным нарушениям и вестибулярным расстройствам и 22-q.

    Наши отоларингологи также регулярно участвуют в больничной клинике расщелины губы и неба, Центре сосудистых аномалий, клинике фиброоптической эндоскопической оценки глотания (FEES) и единственной в регионе детской лаборатории сна. Мы также являемся неотъемлемой частью междисциплинарной программы Aerodigestive, которая лечит сложных пациентов с проблемами верхних дыхательных путей и сопутствующими заболеваниями желудочно-кишечного тракта и нижних дыхательных путей. Кроме того, мы регулярно работаем с Программой инфекционных заболеваний, Центром аллергии и иммунологии, Программой детской неврологии и Центром Sie.

    Наши специалисты также занимаются пластической хирургией и хирургией травм лица, включая рваные раны и переломы, вызванные травмами, врожденными или приобретенными косметическими состояниями и дефектами функций.

    Вирус везикулярного стоматита проникает в клетки через везикулы, не полностью покрытые клатрином, интернализация которых зависит от актина

    Abstract

    Многие вирусы, проникающие в клетки в результате клатрин-зависимого эндоцитоза, имеют размеры, значительно превышающие размеры типичных клатрин-покрытых везикул.Механизмы, с помощью которых вирусы используют клатриновый механизм для эффективной интернализации, остаются неясными. Здесь мы исследовали, как покрытые клатрином везикулы приспосабливаются к вирусу везикулярного стоматита (VSV) во время его проникновения в клетки. Используя визуализацию с высоким разрешением интернализации одиночных вирусных частиц в клетки, экспрессирующие флуоресцентный клатрин и адапторные молекулы, мы показываем, что VSV проникает в клетки через везикулы, частично покрытые клатрином. Мы обнаружили, что в среднем вируссодержащие везикулы содержат больше клатрина и адаптерных молекул клатрина, чем обычные везикулы, но этого увеличения недостаточно для обеспечения полного покрытия везикулы.Далее мы показываем, что интернализация вируссодержащих везикул зависит от актинового механизма. В частности, мы обнаружили, что компоненты актинового механизма рекрутируются в вируссодержащие везикулы, а химическое ингибирование полимеризации актина задерживает вирусные частицы в везикулах на плазматической мембране. Анализируя множественные независимые события интернализации вируса, мы показываем, что VSV индуцирует зародышеобразование клатрина для его поглощения, а не зависит от случайного захвата путем образования ямки, покрытой клатрином.Эта работа дает новое механистическое понимание процесса интернализации вируса, а также поглощения нетрадиционного груза клатрин-зависимым эндоцитарным механизмом.

    Резюме автора

    Клатрин-зависимый эндоцитоз отвечает за большую часть поглощения из плазматической мембраны. Однако многие вирусы, инфицирующие клетки эндоцитарным путем, имеют размеры, превышающие размеры типичного везикула, покрытого клатрином. Работая с вирусом везикулярного стоматита, мы определили, как этот груз попадает в клетки.Мы представляем доказательства того, что VSV индуцирует собственное поглощение клатрин-зависимым эндоцитарным механизмом после связывания с плазматической мембраной. Покрытые клатрином везикулы, которые содержат вирус, отличаются от везикул, которые интернализуют обычный клатрин-зависимый груз, такой как ЛПНП и трансферрин. В частности, мы показываем, что частицы VSV интернализуются везикулами, которые лишь частично покрыты клатрином, а не полным покрытием, характерным для обычных везикул. Мы показываем, что клатрин-зависимый эндоцитарный адаптер AP-2 необходим для входа.Наконец, мы впервые показываем, что актин рекрутируется в содержащие вирус ямки и что интернализация частиц зависит от функции актина. Наша работа дает новое механистическое понимание проникновения VSV, которое может иметь непосредственное отношение к пониманию клатрин-зависимого поглощения других вирусов.

    Образец цитирования: Cureton DK, Massol RH, Saffarian S, Kirchhausen TL, Whelan SPJ (2009) Вирус везикулярного стоматита проникает в клетки через везикулы, не полностью покрытые клатрином, интернализация которых зависит от актина.PLoS Патог 5(4): е1000394. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1000394

    Редактор: John A. T. Young, Институт биологических исследований Солка, Соединенные Штаты Америки

    Поступила в редакцию: 4 ноября 2008 г.; Принято: 24 марта 2009 г.; Опубликовано: 24 апреля 2009 г.

    Авторские права: © 2009 Cureton et al. Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

    Финансирование: Эта работа была поддержана грантами NIH U54 AI057159 (Проект NERCE 1C и Imaging Resource) и GM075252 для TLK (http://www.nih.gov). SPJW является исследователем патогенеза инфекционных заболеваний фонда Burroughs Wellcome Fund (http://www.bwfund.org). Спонсоры не участвовали в разработке исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

    Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

    Введение

    Опосредованный клатрином эндоцитоз является основным путем транспорта от плазматической мембраны к ранним эндосомам. В этом процессе плазматическая мембрана обычно инвагинирует в покрытую клатрином ямку, в которой адапторные молекулы связывают взаимодействие клатрина с грузом. Во время инвагинации вездесущий комплекс адаптерных белков, АР-2, связывается со специфическими сигналами сортировки в цитозольных хвостах мембранных белков, а также с фосфолипидами и клатрином. По мере того как покрытая ямка растет, дополнительные молекулы клатрина и адаптера собираются вместе, образуя закрытую и полностью покрытую структуру [1].Для отделения этой ямки от плазматической мембраны требуется большая ГТФаза, динамин [2], [3]; клатрин быстро отделяется от образующихся покрытых везикул под действием АТФазы Hsc70 и ее кофактора, ауксилина [4], [5].

    Заражение многими вирусами чувствительно к ингибированию клатринового пути. Среди наиболее изученных примеров — вирус везикулярного стоматита (VSV), прототип Rhabdoviridae . Первоначальные доказательства клатрин-зависимого поглощения VSV получены из электронных микрофотографий, на которых видны вирусные частицы, присутствующие в покрытых ямками структурах [6], [7].Более поздние эксперименты показывают, что экспрессия вирусного гена ингибируется доминантно-негативным мутантом клона 15 субстрата пути рецептора эпидермального фактора роста (Eps15), белком, участвующим в клатрин-опосредованном эндоцитозе, или обработкой клеток миРНК, нацеленной на тяжелую цепь клатрина. 8]. Таким образом, для эффективной вирусной инфекции необходим функциональный клатриновый путь.

    Сборка ямок

    с покрытием in vivo была подробно изучена с помощью визуализации живых клеток с использованием отдельных флуоресцентно меченных частиц липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) и реовирусов для визуализации груза [1].Кинетика интернализации в обоих случаях согласуется с захватом груза путем случайного образования покрытых ямок. Кроме того, количество клатрина, необходимое для завершения сборки покрытых ямок, зависит от площади, необходимой для поглощения частиц, имеющих относительные диаметры двух лигандов. В исследованиях с использованием той же клеточной линии сообщалось, что покрытые оболочкой ямки, содержащие частицы гриппа А, напоминают ямки без вирионов (и предположительно содержат другие грузовые молекулы), но интернализация вируса, по-видимому, происходит через ямки, которые образуются непосредственно в месте связывания вируса. , как если бы вирус гриппа индуцировал собственное поглощение [9].Различия в кинетике поглощения между LDL или реовирусом и вирусом гриппа позволяют предположить, что могут быть множественные способы инициации покрытых ямок и что разные способы инициации могут включать разные механизмы сборки и, возможно, разные места назначения для эндоцитированного груза.

    Частицы вируса гриппа и реовируса имеют примерно сферическую форму и не сильно различаются по размеру (диаметр 120 и 85 нм соответственно), поэтому сами по себе размеры частиц, вероятно, не могут объяснить очевидные различия в способах поглощения.VSV представляет собой пулевидную частицу размером 180×70 нм, значительно превышающую диаметр вируса гриппа или реовируса и сравнимую по поперечному сечению. Чтобы исследовать пределы и корреляты альтернативных эндоцитарных механизмов, мы определили кинетику эндоцитоза VSV в везикулах, покрытых клатрином. Везикулы, интернализирующие VSV, по-видимому, содержат недостаточно клатрина, чтобы полностью покрыть вируссодержащую везикулу. Покрытые ямки рекрутируют актин и ассоциированные белки на этапе, необходимом для высвобождения везикул из плазматической мембраны.Мы объединяем эти наблюдения вместе с данными электронной микроскопии в модель интернализации VSV. Мы пришли к выводу, что VSV и потенциально другой груз интернализуются через измененный способ эндоцитоза на основе клатрина.

    Результаты

    Визуализация живых клеток записи VSV

    Чтобы отобразить интернализацию одиночных частиц ВВС в живые клетки, мы конъюгировали флуоресцентный краситель Alexa Fluor 647 с очищенными вирионами. Этот процесс мечения не привел к значительному снижению титра вируса, измеренного с помощью анализа бляшек (рис. S1A).Исследование меченых частиц VSV с помощью конфокальной флуоресцентной микроскопии с вращающимся диском показало отчетливые дифракционно-ограниченные точки с единым гауссовым распределением интенсивности флуоресценции (рис. S1B). Этот результат согласуется с отсутствием агрегатов и присутствием отдельных вирусных частиц. Чтобы изучить, как покрытые клатрином ямки интернализуют VSV, мы заразили клетки BSC-1, стабильно экспрессирующие легкую цепь томата-клатрина A1 (tom-LCa), и получили изображения нижней поверхности клеток с помощью конфокального микроскопа с вращающимся диском.Единичные частицы ВВС прикрепляются к клеткам, и в течение 6–10 мин. Временной ход 28 покадровых видеороликов, более 90% (133/146) прикрепленных частиц, связанных с tom-LCa (рис. 1A, B, S3). Более того, сигнал флуоресценции tom-LCa со временем увеличивался, а затем внезапно исчезал, когда везикула не была покрыта (рис. 1A, C, видео S1, S2). Более 70% (98/133) захваченных частиц подверглись быстрому направленному движению вскоре после исчезновения клатринового сигнала, что указывает на внутриклеточный транспорт вируссодержащих везикул (видео S1, S2).Те немногие частицы, которым не удалось ассоциироваться с клатрином, остались на поверхности клетки и не демонстрировали этого быстрого направленного движения. Таким образом, клатрин-опосредованный эндоцитоз объясняет поглощение большей части прикрепленных частиц VSV.

    Рисунок 1. Визуализация живых клеток клатрин-зависимого эндоцитоза одиночных частиц VSV.

    (A) Разделенные изображения одной клетки BSC-1 (слева, а также на видео S1), временно экспрессирующей tom-LCa (серый), выделяют 3 вирусные частицы (синие, обведены) во время интернализации покрытыми клатрином ямками (CCP) .Кимограммы (справа) срезов клеточной поверхности, показывающие флуоресценцию tom-LCa с течением времени для покрытых клатрином везикул (CCV), содержащих и не содержащих вирус. (B) График % вирусных частиц, захваченных CCP или интернализированных CCV, был построен для 146 частиц, которые прикрепились к 28 различным клеткам во время получения изображения. (C) Мозаичное представление изображений клеток BSC-1, совместно экспрессирующих σ2-eGFP (зеленый) и tom-LCa (красный), вырезанных из замедленной съемки (видео S2), показывающих появление VSV на поверхности клетки ( время, t = −18 с) относительно точки (t = 0) обнаружения клатрина над фоном.(D) График кинетики рекрутирования AP-2 и клатрина в CCP панели C. Интенсивность флуоресценции была построена относительно времени обнаружения клатрина и выражена в % от среднего максимального клатрина, наблюдаемого во всех ямах, в которых отсутствует вирус. Точки представляют собой средневзвешенное значение интенсивности флуоресценции, рассчитанное, как описано в разделе «Материалы и методы». (E) График средней кинетики рекрутирования LCa и σ2 в КПК, содержащие (справа, из 4 клеток) или не содержащие (слева, из 2 из 4 клеток) вирус.Средняя интенсивность и время флуоресценции выражены в % относительно отсутствия вируса CCV, наблюдаемого в тех же клетках. Интенсивность флуоресценции рассчитывали для 8 равноотстоящих интервалов и наносили на график +/- стандартная ошибка. (F) График зависимости флуоресценции клатрина от времени жизни везикул для КПК, не содержащих (незаштрихованные кружки) или содержащих (синие) вирусы. Флуоресценцию выражали в % относительно среднего максимума tom-LCa в ямках без VSV. Среднее время жизни ямок, содержащих вирус, составляло 110+/-44 с (15 клеток), что статистически отличалось (критерий Стьюдента: p = 2e-12) от времени жизни ямок без вируса (51+/-16 с из 8 клеток). тех же клеток).Пиковая интенсивность флуоресценции клатрина в лунках, содержащих и не содержащих вирус, составляла 155+/-69 и 100+/-34 соответственно. Разница между этими значениями статистически значима (критерий Стьюдента: p = 1e-6).

    https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1000394.g001

    АР-2 — функциональный адаптер для продуктивной интернализации ВВС через ямки, покрытые клатрином

    Чтобы определить, присутствует ли AP-2 в покрытых клатрином ямках, содержащих VSV, мы визуализировали интернализацию вируса в клетках, экспрессирующих tom-LCa, и субъединицу σ2 AP-2, слитую с eGFP (σ2-eGFP).Все без исключения σ2-eGFP появлялись и исчезали вместе с tom-LCa (рис. 1C-E), демонстрируя, что интернализация VSV происходит в покрытых клатрином ямках, содержащих AP-2. Мы исследовали количество и кинетику ассоциации tom-LCa и σ2-eGFP в ямках, содержащих вирус, и сравнили их с ямками, в которых вирус отсутствует. Рекрутирование клатрина и AP-2 изначально одинаково, независимо от вируса (рис. 1D, E), но вируссодержащие ямки часто демонстрируют временное плато в накоплении tom-LCa, за которым следует последующий всплеск накопления клатрина (рис. 1D, E). ).Ямки, содержащие вирус, показали более длительное время жизни и в среднем содержали больше клатрина и AP-2, чем ямки в той же клетке, в которой отсутствовал вирус (рис. 1E, F). В сочетании с другими экспериментами на клетках, экспрессирующих tom-LCa (см. ниже), мы измерили накопление клатрина и продолжительность жизни ямок для 46 ямок, содержащих вирус, и сравнили их с 92 ямками, в которых вирус отсутствовал. Ямки, содержащие вирус, набирают в среднем в 1,5 раза больше клатрина и имеют время жизни 110+/-44 с по сравнению с 51+/-16 с для ям без вируса (рис. 1F).Таким образом, эффективная интернализация VSV происходит через покрытые ямки, содержащие AP-2, и по сравнению с ямками, не содержащими вирус, те, которые содержат вирус, имеют увеличенное время жизни и часто содержат больше клатрина и AP-2.

    Используя siRNA для нацеливания на субъединицу µ2 AP-2 в клетках, конститутивно экспрессирующих σ2-eGFP, мы показали, что истощение AP-2 полностью ингибирует интернализацию клатрин-зависимого VSV (рис. 2). Потеря μ2 может сопровождаться исчезновением сигнала σ2-eGFP от покрытых ямок, поскольку сборка одного гетеротетрамера AP-2 зависит от всех четырех его субъединиц.Как и ожидалось, клетки, в которых отсутствует обнаруживаемый σ2-eGFP (> 95% популяции), не смогли принять зависимый от AP-2 груз, трансферрин, который остался в ловушке на поверхности клетки (рис. 2А, красный сигнал). Кроме того, проверка 37 вирусных частиц, прикрепленных к 5 различным клеткам, лишенным АР-2, показала, что ВВС остается прикрепленным к поверхности клеток (рис. 2А, синий сигнал). Напротив, клетки, обработанные контрольной siRNA, демонстрировали нормальные уровни σ2-eGFP, надежное поглощение трансферрина и сохраняли способность интернализовать VSV (42/63 частицы; 8 клеток) (рис. 2A, B).В других клетках следы экспрессии АР-2 оставались после обработки миРНК. В таких условиях мы обнаружили, что низкие уровни AP-2 накапливаются под частицами, и что вирус интернализуется клатрином (не показано). Таким образом, низкие уровни АР-2 достаточны для поглощения клатринзависимого вируса. Используя рекомбинантный VSV, который экспрессирует люциферазу светлячка в качестве маркера инфекции (rVSV-LUC), мы также показываем, что истощение μ2 приводит к уменьшению инфекции клеток, о чем свидетельствует снижение активности люциферазы на 65% (рис. 2C).Эти данные показывают, что AP-2 необходим для клатрин-зависимого поглощения VSV.

    Рисунок 2. AP-2 — функциональный адаптер для интернализации VSV.

    (A) Изображение клеток BSC-1 (слева), стабильно экспрессирующих σ2-eGFP (зеленый), обработанных нецелевыми (NT) или μ2-адаптиновыми миРНК и подвергшихся воздействию tf, меченного Alexa 568 (красный). Изображения были получены из нижней и средней части клеток, обработанных NT и µ2 siRNA, соответственно. Пунктирные белые линии обозначают границы ячеек. Серия изображений кимографа, показывающая интернализацию VSV (синий) в клетках, обработанных миРНК (справа).Обратите внимание на отсутствие интернализации вируса в клетках, лишенных σ2-eGFP. (B) График % связанных частиц VSV, которые были интернализированы 7 клетками, обработанными миРНК NT, и 5 клетками, обработанными миРНК μ2, и дефектными по поглощению трансферрина. (C) График, показывающий влияние истощения μ2 на экспрессию гена VSV. Клетки дважды трансфицировали указанными миРНК и инокулировали rVSV-LUC при MOI 0,5. Вирусные частицы удаляли через 1 ч, а люминесценцию определяли через 4 ч.я. Значения представляют собой среднее +/- стандартное отклонение 2 независимых экспериментов.

    https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1000394.g002

    Dynamin требуется для записи VSV

    Используя клетки, экспрессирующие низкие уровни динамин2-eGFP (dyn2-eGFP) и tom-LCa, мы сравнили рекрутирование динамина в 11 ямках, содержащих вирус, с 18 ямами, в которых вирус отсутствовал. Как было показано ранее для ямок без вируса, рекрутирование динамина быстро увеличивалось на поздних стадиях роста ямок (рис. 3А-С).Содержащие вирус ямки также рекрутируют динамин с всплеском на более поздних стадиях роста (рис. 3А–С, видео S3). Количественное определение пиковой флуоресценции dyn2-eGFP показывает, что вируссодержащие ямки рекрутируют в среднем в пять раз больше динамина, чем ямки без вируса (рис. 3C, D).

    Рисунок 3. Усиленное рекрутирование динамина во время интернализации вируса.

    (A) Мозаичное представление изображений клеток BSC-1, совместно экспрессирующих dyn2-eGFP (зеленый) и tom-LCa (красный), вырезанных из замедленной съемки (видео S3), показывающих внешний вид VSV в поверхности клеток (t = −8 с) относительно обнаружения клатрина (t = 0 с).(B) График кинетики рекрутирования dyn2 и клатрина в CCP, показанный на панели A. Флуоресценция была выражена в % от среднего максимального клатрина, измеренного во всех ямках без вируса, а средневзвешенное значение было построено, как описано в разделе «Материалы». и методы. (C) График средней кинетики рекрутирования LCa и dyn2 в CCP, содержащий (справа) или не содержащий (слева) вирус. Средняя интенсивность и время флуоресценции выражены в % относительно отсутствия вируса CCV, наблюдаемого в тех же клетках.Интенсивность флуоресценции рассчитывали для 8 равноотстоящих интервалов и наносили на график +/- стандартная ошибка. Вирусные события были из 5 клеток, а события без вируса были проанализированы в 3 из тех же клеток. (D) График максимального набора динамина относительно времени жизни ямки для CCV, содержащих (синий) или не содержащих (незаштрихованные круги) вирус. Флуоресценция динамина выражается в % от среднего пика, наблюдаемого для ямок, в которых отсутствует вирус. Среднее время жизни ямок, содержащих вирус, составляло 148+/-71 с (5 клеток) и статистически отличалось (критерий Стьюдента: p = 7e-4) от времени жизни ямок без вируса (55+/-21 с от 3 клеток). одних и тех же клеток).Пиковая интенсивность флуоресценции динамина в лунках, содержащих и не содержащих вирус, составляла 548+/-221 и 100+/-45 соответственно. Разница между этими значениями статистически значима (критерий Стьюдента: p = 2e-5). (E) Кимограф клеток BSC-1, экспрессирующих σ2-eGFP и tom-LCa. Обратите внимание на отсутствие интернализации CCP (стрелки) и поглощения вируса (синий) в клетках, обработанных 80 мкМ dynasore. Видео S4 изображает ингибирование интернализации VSV после лечения dynasore. (F) График процента связанных частиц VSV, которые были интернализованы в присутствии (n = 4 клеток) и в отсутствие (n = 5 клеток) диназора.(G) Графики влияния dynasore на проникновение VSV и экспрессию генов. Клетки инфицировали rVSV-LUC (MOI = 0,5) и подвергали воздействию указанной концентрации dynasore 1–4 ч p.i. (слева) или до заражения -0,5–4 ч после заражения (Правильно). Значения люминесценции измеряли через 5 ч p.i. и представляют собой среднее +/- стандартное отклонение трехкратных образцов.

    https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1000394.g003

    Используя dynasore [10], проницаемый для клеток низкомолекулярный ингибитор динамина, мы показали, что функция динамина необходима для клатрин-зависимой интернализации VSV.Как сообщалось ранее [10], добавление диназора вызывало остановку образования покрытых ямок и захваченных клатриновых структур на плазматической мембране (рис. 3Е). Зависимое от клатрина поглощение VSV также было полностью ингибировано (рис. 3E, F). Вирусные частицы, попавшие в покрытые ямки в течение первой минуты после добавления диназора, не смогли интернализоваться и оставались в ловушке в течение 13 минут. продолжительность покадрового видео в структурах, содержащих клатрин и AP-2 (рис. 3E и видео S4). Из 144 вирусных частиц, которые прикреплялись к клеткам в присутствии диназора, ни одна не была интернализована клатрином (рис. 3F), в отличие от высокоэффективной клатрин-зависимой интернализации VSV в отсутствие диназора (рис. 3F).Используя анализ rVSV-LUC, мы также показали, что диназор функционально ингибирует проникновение вируса (рис. 3G). Экспрессия гена VSV была относительно нечувствительна к добавлению dynasore через 1 час после инокуляции, но не к его добавлению непосредственно перед инокуляцией вируса (рис. 3G). Эти данные показывают, что функциональный динамин имеет решающее значение для клатрин-зависимого поглощения VSV и сопутствующей продуктивной инфекции клеток.

    Рекрутирование ауксилина в везикулы, содержащие VSV

    Клеточная АТФаза, Hsc70, и ее кофактор, ауксилин, катализируют разборку клатрина из эндоцитарных везикул.Auxilin1 рекрутируется в покрытые ямки после завершения роста клатрина во время отпочковывания везикул, запуская быстрое обнажение новообразованных везикул [4], [5]. Используя клетки, коэкспрессирующие eGFP-aux1 и tom-LCa, мы исследовали, рекрутируют ли покрытые ямки, содержащие вирус, также ауксилин. Мы получали изображения с 2-секундными интервалами, чтобы убедиться, что мы зафиксировали полную кинетику поступления ауксилина. Мы визуализировали интернализацию 7 вирусных частиц и сравнили время жизни и количество tom-LCa и eGFP-aux1 в этих везикулах с 12, в которых вирус отсутствовал.Степень рекрутирования ауксилина-1 в покрытые ямки не менялась в присутствии VSV (рис. 4А, видео S5). Измеряя продолжительность всплеска флуоресценции eGFP-aux1, мы обнаружили небольшое, но статистически незначимое увеличение продолжительности всплеска ауксилина с 5+/-1 с до 7+/-2 с во время проникновения VSV. Эти данные показывают, что вируссодержащие везикулы обнажаются так же, как и везикулы без вируса (рис. 4В).

    Рис. 4. Рекрутирование ауксилина во время вскрытия везикул, содержащих ВВС.

    (A) Кимограммы интернализации VSV клеткой BSC-1, экспрессирующей tom-LCa и eGFP-aux1 (слева), вместе с графиком кинетики рекрутирования ауксилина (aux1) и клатрина (LCa) (справа). Показанное событие интернализации показано на видео S5. (B) Графики средней кинетики рекрутирования клатрина и ауксилина в CCP, содержащие (справа) или не содержащие (слева) вирус. Средняя интенсивность и время флуоресценции выражены в % относительно отсутствия вируса CCV, наблюдаемого в тех же клетках.Интенсивность флуоресценции рассчитывали для 8 равноотстоящих интервалов и наносили на график +/- стандартная ошибка. Вирусные события были из 2 независимых клеток, и события без вируса были проанализированы в 1 из этих клеток. Разница между максимальной флуоресценцией aux1 в ямках, содержащих и не содержащих VSV, не является статистически значимой (t-критерий Стьюдента: p = 0,1).

    https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1000394.g004

    Локальная полимеризация актина при интернализации ВВС

    Эффекты VSV на образование клатрино-покрытых ямок указывают на параллели с интернализацией крупных и более стабильных клатрино-покрытых структур (Saffarian and Kirchhausen, , представили ) и инвазивными бактериями Listeria monocytogenes [11].Полимеризация актина играет роль в интернализации таких структур, хотя она не требуется для интернализации обычных покрытых клатрином ямок [12] и Saffarian and Kirchhausen, представили . Поэтому мы проверили, рекрутируется ли актин, фактор нуклеации актина, Arp3, или кортактин, активатор комплекса Arp2/3, в покрытые ямки. Мы использовали для этой цели клетки, экспрессирующие tom-LCa и eGFP, слитые с каждым из этих белков. Во время роста содержащих вирус ямок уровни актина, Arp3 и кортактина неуклонно увеличивались (рис. 5B, D и F).Более того, как для Arp3, так и для кортактина наблюдался пик флуоресценции непосредственно перед началом обнажения везикул (рис. 5A–F, видео S6, S7, S8). Напротив, ямки, в которых отсутствовал VSV, имели низкие и переменные уровни флуоресценции актина и Arp3 на протяжении всей фазы роста, которые были чуть выше фона (рис. 5B и D). Привлечение кортактина было примерно в 4 раза ниже, чем в ямах, содержащих вирус (рис. 5F). Мы пришли к выводу, что сборка актина связана с проникновением VSV через клатриновый путь.

    Рисунок 5. Динамика актинового цитоскелета во время клатрин-зависимого поглощения VSV.

    (А, С и Е). События интернализации VSV в клетках BSC-1, совместно экспрессирующих tom-LCa и eGFP-актин (A), arp3-eGFP (C) или кортактин-eGFP (E), показаны в виде кимографов и на видео S6, S7, S8 соответственно. Показана флуоресценция с течением времени (слева направо) актинового компонента цитоскелета (вверху), tom-LCa (в центре) и слияние этих следов с вирусом (внизу) и представлены графически справа с использованием того же подхода. как на рисунке 1D.(B, D и F) Показаны графики средней кинетики рекрутирования клатрина и актина (B), arp3 (D) и кортактина (F) в везикулы, не содержащие (слева) или содержащие (справа) вирус. Средняя интенсивность и время флуоресценции выражены в % относительно отсутствия вируса CCV, наблюдаемого в тех же клетках. Интенсивность флуоресценции рассчитывали для 8 равноотстоящих интервалов и наносили на график +/- стандартная ошибка. Данные об интернализации вируса собирали из 5, 3 и 2 клеток для панелей B, D и F соответственно и сравнивали с событиями отсутствия вируса из 2, 2 и 3 тех же клеток соответственно.Различия между максимальными значениями флуоресценции актина, Arp3 и кортактина в ямках, содержащих и не содержащих ВВС, статистически значимы. критерий Стьюдента: актин p = 2e-5; Arp3 p = 4e-4; кортактин р = 0,003.

    https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1000394.g005

    Ингибирование полимеризации актина снижает эффективность интернализации ВВС

    Чтобы оценить важность функции актина во время интернализации VSV, мы использовали цитохалазин D (cytoD) или латрункулин B (latB) для ингибирования сборки актина.CytoD связывается с растущими концами актиновых филаментов [13], а latB секвестрирует мономеры G-актина [14]. Как было показано ранее [12], CytoD или latB уменьшают число событий зарождения покрытых клатрином ямок, но не влияют ни на кинетику сборки оболочки, ни на последующую интернализацию этих ямок (Fig. 6C). Предварительная обработка клеток цитоD или latB не влияла на эффективность (рис. 6А) или время (среднее  = 160 с; тест Стьюдента t -тест p = 0,24) на ассоциацию вируса с ямкой, покрытой клатрином.Вместо этого оба соединения ингибировали проникновение, блокируя по крайней мере на 75% переход содержащих вирус ямок в завершенные везикулы (рис. 6В).

    Рисунок 6. Химическое ингибирование полимеризации актина снижает эффективность интернализации ВВС.

    (A–D). Там, где указано, клетки BSC-1 обрабатывали 20 мкМ цитохалазина D (cytoD) или 6,3 мкМ латрункулина B (latB) в течение 10 мин. до прививки VSV и получения покадровых изображений. На видео S9 показано влияние лечения цитоD на интернализацию VSV.% прикрепленных частиц, захваченных покрытой ямкой (A) и впоследствии интернализованных (B), наряду с % CCP без вируса, которые завершаются в течение 80 с (C), были нанесены на график для создания показанных графиков. Данные в (A) и (B) относятся к 28 независимым контрольным клеткам, 5 клеткам, обработанным цитоD, и 2 клеткам, обработанным latB. Данные в (C) взяты из 2 независимых ячеек в каждом состоянии. (D) Графики показывают флуоресценцию клатрина в зависимости от времени жизни CCV для событий полной (кружки) или неполной (треугольники) интернализации для ям, содержащих (синие) или не содержащих (светлые кружки) VSV.Флуоресценция клатрина выражена по отношению к ее интенсивности в необработанных ямках без вируса, которая была принята за 100. Интернализация анализировалась из 4 клеток в отсутствие цитоD (16 полных интернализации VSV, 23 полных невирусных события) или 3 клеток (8 полных и 11 неполных событий VSV, 24 полных невирусных события) в присутствии цитоD. Пиковая флуоресценция клатрина при вирусных событиях статистически значимо не отличалась в присутствии и отсутствии цитоD (t-критерий Стьюдента p = 0.2 для полных и неполных событий). (E) Влияние цитоD на проникновение VSV и экспрессию генов. Клетки инфицировали rVSV-LUC (MOI = 0,5) и подвергали воздействию указанной концентрации цитохалазина D через 2–5 ч p.i. (слева) или до заражения -0,5–5 ч после заражения (Правильно). Значения люминесценции измеряли через 5 ч p.i. как описано в материалах и методах. Показанные значения являются средним значением трех повторов +/- стандартное отклонение. (F) Влияние latB на проникновение VSV и экспрессию генов. Клетки обрабатывали, как в (Е), за исключением того, что цитоD был заменен на latB.

    https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1000394.g006

    Кроме того, мы установили, что обработка цитоD, который оказывает незначительное заметное влияние на кинетику образования безвирусных покрытых ямок, замораживает сборку вируссодержащего клатрина. пальто (рис. 6D). В присутствии цитоD увеличение флуоресценции клатрина в точках, помеченных VSV, достигло уровня, близкого к среднему уровню для необработанных клеток, но затем две метки оставались связанными, часто на время эксперимента (рис. 6D, видео S9). .Те вирусные частицы, которые все же интернализировались (обнаружено по потере сигнала от клатрина и быстрому перемещению вирусной метки от места образования покрытых ямок), оставались связанными с клатрином в течение 263+/-34 с, хотя и в 3 раза дольше, чем средний срок жизни. время безвирусных покрытых ям (рис. 6D). Используя rVSV-LUC, мы также показали, что лечение цитоD и latB во время инфекции оказывало дозозависимое влияние на экспрессию гена люциферазы, в то время как введение этих соединений через 1 час после заражения имело незначительный эффект в течение более трех часов после добавления препарата. (Рисунок 6Е, F).Мы пришли к выводу, что сборка актина имеет решающее значение для интернализации VSV, но не для экспрессии генов после проникновения вируса. Более того, по крайней мере один актин-зависимый этап необходим для завершения, защемления и диссоциации клатриновой оболочки, но не для ее зародышеобразования и начальной сборки.

    Сборка Клатрина локально индуцируется частицами VSV

    Является ли захват VSV покрытой ямкой случайным диффузионным столкновением, как это происходит с LDL [1], или вирус индуцирует образование оболочки после связывания? Мы изучили траектории 37 вирусных частиц на поверхности клетки и обнаружили, что большинство из них (n = 25) диффундировали случайным образом (рис. 7A, B) с коэффициентами диффузии (D) между 5×10 −11 см 2 с −1 и 5×10 −12 см 2 с −1 .Подмножество частиц двигалось быстрее (в среднем D = 5×10 90 791 -10 90 792 см 90 791 2 90 792 с 90 791 -1 90 792), но в конечном итоге также замедлилось до сопоставимых скоростей диффузии (рис. 7А). Независимо от начальной скорости диффузии все вирусные частицы становились практически неподвижными по крайней мере за 20 с (в среднем = 42 с) до самого раннего обнаружения клатрина (рис. 7А, В). Для подмножества частиц, которые прикрепились во время визуализации, а затем продуктивно вошли (n = 98), среднее время между связыванием вируса и обнаружением клатрина составило 122 с (рис. 7C).Анализ всех случаев захвата вируса показал, что клатрин колокализуется с частицами с момента его обнаружения, что указывает на то, что ямки, захватывающие ВВС, формируются рядом с вирионами или непосредственно под ними.

    Рис. 7. Кинетика диффузии и захвата ВВС ямками, покрытыми клатрином.

    (A) Показан график диффузии (среднеквадратичное смещение) 4 одиночных частиц относительно времени обнаружения клатрина (t = 0). Обратите внимание на разрыв по оси Y, чтобы подчеркнуть разницу между быстро (светлые кружки) и медленно (синие) диффундирующими частицами.(B) Показан график средней скорости диффузии (среднеквадратическое смещение) для 13 частиц (n = 4 клеток), отслеженных в течение 60 с до обнаружения клатрина (t = 0). (C) Гистограмма времени между присоединением VSV и появлением клатрина или адаптера показана для 98 частиц (слева; n = 28 клеток) и сравнивается с смоделированной кинетикой случайного захвата VSV (в центре) или LDL (справа). ) КПК. Среднее время до захвата груза показано в правом верхнем углу каждой панели.

    https://дои.org/10.1371/journal.ppat.1000394.g007

    Чтобы проверить, согласуются ли наши экспериментальные наблюдения со случайным захватом VSV клатрином, мы выполнили моделирование методом Монте-Карло. Мы использовали MATLAB для аппроксимации случайного движения частиц VSV на сетке 100×100 с экспериментально определенной скоростью диффузии 1×10 −11 см 2 с −1 . Мы оценили вирусный след размером 120×120 нм 2 , что является хорошей оценкой площади поверхности, с которой напрямую контактирует вирус размером 180×70 нм.Мы вводили покрытые клатрином ямки со временем жизни 20 с (время, после которого ямка будет слишком сужена для размещения частицы VSV) в случайных местах в соответствии с экспериментально определенной скоростью зарождения 0,6 пит/10 8 нм 2 s -1 , полученный из 6 клеток. Чтобы оценить коэффициент диффузии, мы рассчитали типичную скорость смещения частиц, построив квадрат среднего смещения в зависимости от времени (рис. 7B). Наклон линии наилучшего соответствия обеспечивает скорость 0.0041 µ 2 с −1 , который мы использовали для расчета репрезентативного коэффициента диффузии (D) 1×10 −11 см 2 с −1 по формуле: (среднее смещение) 2  = 4Dt. Это наиболее точно отражает скорость диффузии вируса во время захвата (рис. 7B). Используя эти параметры, среднее время захвата вируса составило 2000 с, что заметно отличается от измеренного времени в 122 с (рис. 7C). Наше моделирование предсказывает среднее время захвата частицы ЛПНП 18 секунд, что хорошо согласуется с экспериментальным значением 20 секунд [1].Это подтверждает наш протокол моделирования и вместе с данными о вирусах свидетельствует о том, что ямки, участвующие в поглощении вируса, предпочтительно зарождаются в непосредственной близости от частиц VSV.

    Обсуждение

    Мы исследовали, как VSV проникает в клетки-хозяева посредством клатрин-зависимого эндоцитарного механизма, используя комбинацию визуализации живых клеток с высоким разрешением, электронной микроскопии и количественных анализов вирусной инфекционности. Сравнивая клатрин-зависимое поглощение одиночных вирусных частиц с образованием канонических покрытых везикул, мы обнаружили поразительные различия между этими двумя процессами.В отличие от типичных покрытых везикул, вируссодержащие везикулы не имеют полной клатриновой оболочки и нуждаются в локальной полимеризации актина после сборки оболочки для эффективной интернализации. Мы также получили доказательства того, что VSV способствует собственному поглощению, индуцируя образование клатриновой оболочки в непосредственной близости от вирусной частицы. Это исследование раскрывает один механизм, с помощью которого клетки млекопитающих усваивают большой клатрин-зависимый груз посредством скоординированного действия эндоцитарных и цитоскелетных компонентов. Этот способ клатрин-зависимого эндоцитоза разделяет некоторые черты клатринового эндоцитарного механизма Saccharomyces cerevisae , а также поглощение крупных бактерий, таких как Listeria monocytogenes , клетками млекопитающих.

    Интернализация VSV через структуры, частично покрытые клатрином

    Ранее мы установили прямую связь между размером оболочки и интенсивностью флуоресценции клатрина или AP-2, связанной с покрытыми эндоцитами ямками и везикулами [1]. Мы сравнили количество клатрина, связанного с везикулами, содержащими и не содержащими ВВС. В среднем вируссодержащие везикулы содержали в 1,5 раза больше клатрина, максимум в 2,5 раза больше, а в некоторых случаях меньше клатрина, чем везикулы без вируса (рис. 1F).Хотя ямки, интернализирующие VSV, как правило, содержат больше клатрина, этого увеличения недостаточно, чтобы полностью покрыть везикулу, содержащую вирусную частицу. Размер частиц VSV составляет 180×70 нм, что может уместиться в сферическом пузырьке с внутренним радиусом 90 нм или в вытянутом сфероиде с полярным радиусом 90 нм и экваториальным радиусом 35 нм. Площадь поверхности таких везикул соответственно в 9 и 3 раза больше, чем у обычных везикул, покрытых клатрином, с внутренним радиусом 30 нм.Таким образом, чтобы полностью покрыть клатрином вируссодержащие везикулы, потребуется по меньшей мере в 3 раза больше клатрина, чем в обычных везикулах. Наши данные не согласуются с этим уровнем клатрина в везикулах, интернализирующих VSV, что приводит нас к заключению, что клатрин не полностью покрывает такие везикулы. Дальнейшее подтверждение этого вывода обеспечивается электронными микрофотографиями, которые показывают, что VSV присутствует в структурах, покрытых клатрином, которые содержат удлиненную трубчатую шейку, в которой отсутствует характерная для клатрина плотность (рис. 8А).Эти изображения также согласуются с более ранними электронными микрофотографиями, на которых показано проникновение ВВС в клетки, где клатрин виден только на части везикулы [15], [16], [17]. Однако из этой более ранней работы было неясно, представляют ли статические ЭМ-изображения промежуточную стадию процесса сборки клатрина во время интернализации вируса. Изучая этот процесс в реальном времени в живых клетках, наши данные дают убедительные доказательства того, что вирус проникает в клетки в везикулах, не имеющих полной клатриновой оболочки.

    Рисунок 8. Визуальное сравнение формирования CCV и входа VSV.

    (A) Электронные микрофотографии, изображающие последовательные стадии формирования CCV (вверху) и проникновения VSV (внизу). Клатрин выглядит как электронно-плотная оболочка на цитозольной стороне плазматической мембраны, и ранние стадии сборки клатрина неразличимы. Обычные ямки затем принимают суженную U-образную форму, а вируссодержащие структуры образуют удлиненные трубки, покрытые клатрином. Ямки, лишенные вируса, полностью покрываются и отщепляются от мембраны в виде сферических везикул, но вирусные ямки созревают в более крупные, частично непокрытые структуры.В указанных образцах клетки обрабатывали 20 мкМ CytoD в течение 10 минут и инкубировали с rVSV при M.O.I. от 5000 за 15 мин. Клетки фиксировали и окрашивали, как описано в разделе «Материалы и методы». (B) Модель интернализации VSV клатриновым и актиновым механизмом. Обычные покрытые клатрином везикулы (вверху) конститутивно зарождаются на клеточной поверхности и растут за счет добавления клатрина и адапторных белков до образования полностью покрытых суженных ямок. Ямки отделяются от плазматической мембраны зависимым от динамина, но независимым от актина способом, и клатриновая оболочка быстро разбирается с помощью Hsc70 и ауксилина.Во время клатрин-зависимой интернализации VSV ямки преимущественно образуются в непосредственной близости от вирусных частиц. Растущая клатриновая решетка придает кривизну кончику ямки, но сборка покрытия прекращается, когда суженный край ямки встречается с заключенной в ней частицей. Затем актиновый цитоскелетный механизм задействуется динамином, чтобы стимулировать дальнейшую инвагинацию частицы. Динамин, возможно, в сочетании с актином опосредует расщепление вируссодержащей ямки, а клатрин не покрыт оболочкой.

    https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1000394.g008

    Использование адаптера Clathrin во время интернализации вируса

    Адаптерный комплекс гетеротетрамеров AP-2 рекрутирует клатриновые трискелионы на плазматическую мембрану посредством прямого взаимодействия с фосфолипидами, рецепторными молекулами и клатрином. Почти все покрытые клатрином ямки на клеточной поверхности содержат AP-2, и истощение его субъединицы μ2 уменьшает образование ямок более чем в 10 раз [18]. Функционально истощение AP-2 ингибирует захват трансферрина [18]; однако его влияние на другие клатрин-зависимые грузы менее ясно.Например, истощение σ2-субъединицы AP-2 ингибирует поглощение EGF при 37°C [19], но не после преинкубации клеток с лигандом при 4°C [18],[19],[20]. Для вируса гриппа А истощение эпсина 1 [21], но не α-субъединицы АР-2 [20], нарушало клатрин-зависимую интернализацию вирусных частиц. После представления этой рукописи в связанном исследовании интернализации VSV сообщалось, что истощение α- и μ-субъединиц AP-2 в клетках HeLa не ингибирует инфекцию [22].Однако авторы не смогли напрямую отобразить стадию проникновения вируса и, следовательно, не смогли определить, проник ли вирус в клетки HeLa с истощенным AP-2 зависимым или независимым образом. В настоящем исследовании мы обнаружили, что истощение μ2-адаптина в клетках BSC-1 предотвращает клатрин-зависимое поглощение VSV и снижает экспрессию вирусного гена VSV (рис. 2). В клетках BSC-1, одновременно экспрессирующих σ2-eGFP и tom-LCa, удаление AP-2 снижало скорость образования покрытых везикул примерно в 10 раз, а образовавшиеся ямки содержали низкие уровни AP-2.Важно отметить, что VSV интернализуется только структурами, содержащими клатрин, которые также содержат флуоресценцию σ2-eGFP. Таким образом, наши данные подтверждают существенную потребность в AP-2 в клатрин-зависимом поглощении VSV, по крайней мере, в клетках BSC-1. Почему клатрин-зависимый эндоцитоз вируса гриппа А нечувствителен к истощению АР-2 и, по-видимому, зависит от эпсин-1, неясно. Возможно, это различие отражает различия в использовании клеточных рецепторов или способности запускать набор специфических клеточных факторов в места связывания вируса.

    Актиновый механизм играет ключевую роль в интернализации вируса

    Хотя много данных подтверждает роль актинового аппарата в клатрин-зависимом эндоцитозе у дрожжей Saccharomyces cerevisae , его роль в клетках млекопитающих неясна. У S. cerevisae покрытые клатрином пятна на клеточной поверхности созревают в трубчатые инвагинации ∼200 нм с белками оболочки на их концах [23]. Механизм актинового цитоскелета задействуется после образования оболочки и обеспечивает существенную силу для деформации и интернализации мембраны [24].В клетках млекопитающих клатриновые структуры различаются по своей актиновой зависимости при интернализации. Химические ингибиторы полимеризации актина снижают скорость образования клатринопокрытых ямок в 2 раза, но не блокируют поглощение обычных ямок с покрытием [12]. Исследования с визуализацией живых клеток предоставили доказательства того, что подмножество клатриновых структур, собранных на плазматической мембране, задействует актиновый аппарат и требует функции актина для своей интернализации [12], [25], [26], [27], [28]. Что отличает это подмножество структур, неизвестно, но они могут соответствовать большим массивам клатрина, поскольку их время жизни намного больше (> 60 с), чем у обычных покрытых ямок.

    В настоящем исследовании мы обнаружили, что клатриновые структуры, интернализирующие ВВС, нуждаются в полимеризации актина для эффективного поглощения клетками (рис. 6). Аналогично ситуации у дрожжей [24], [29], полимеризация актина необходима после рекрутирования клатрина (Рис. 6D). Какой именно этап интернализации является актин-зависимым, неизвестно, но, возможно, образование актиновых филаментов облегчает инвагинацию и, возможно, деление покрытых ямок, содержащих частицу VSV. Наши данные о необходимости актинового аппарата для интернализации VSV контрастируют с более ранней работой, которая показала, что заражение VSV поляризованных клеток MDCK с апикальной, но не с базолатеральной поверхности ингибировалось при обработке клеток цито D [30].Однако в этих экспериментах базолатеральное поглощение люциферазы желтой, общего маркера для всех форм интернализации, не было затронуто. Таким образом, базолатеральное проникновение VSV через клатрин/актин-независимый путь может объяснить успешную инфекцию клеток MDCK, обработанных цитоD, и будущие исследования с прямой визуализацией могут установить путь проникновения.

    Что регулирует полимеризацию актина во время проникновения VSV, неизвестно. Однако мы не наблюдали глобальных изменений в актиновом цитоскелете во время проникновения вируса, что указывает на то, что это должно происходить локально.Возможно, физическая ассоциация между компонентами актинового и клатринового механизмов регулирует локальную полимеризацию актина во время поглощения вируса. Одним из возможных кандидатов, который может обеспечить эту ассоциацию, является динамин, который содержит сайты связывания для нескольких белков, которые прямо или косвенно активируют комплекс Arp2/3, включая кортактин [31], [32], синдапин [33], [34] и интерсектин. [35],[36]. В соответствии с этой возможностью рекрутирование динамина совпадает с рекрутированием кортактина на поздних стадиях интернализации вируса (рис. 3, 5).Потребуются дальнейшие исследования, чтобы полностью понять потребность в функции актина во время проникновения VSV.

    VSV индуцирует собственное поглощение покрытыми клатрином ямками

    Комплексы трансферрина и ЛПНП-рецептора быстро диффундируют на плазматической мембране до их захвата ямками, которые конститутивно пробуют участки клеточной поверхности [1]. Здесь мы измерили диффузию частиц VSV и показали, что они диффундируют в 60 раз медленнее, чем комплексы LDL-рецептор (рис. 7B). Однако среднее время между связыванием ВВС с клеткой и его захватом ямкой составляет 122 с, что лишь в 6 раз превышает измеренное время захвата ЛПНП [1].Используя моделирование, которое точно предсказывает среднее время захвата ЛПНП как 20 с, мы оцениваем, что для случайного захвата VSV требуется 2000 с (рис. 7C). Как мы можем объяснить эту существенную разницу между предсказанным и наблюдаемым временем до захвата VSV? Мы проверили, как корректировка параметров, используемых в нашем моделировании, которое точно прогнозирует время для захвата ЛПНП, изменит прогнозируемое время для захвата VSV. Биологически значимые корректировки скорости диффузии вируса или плотности образования ямок на плазматической мембране не могут обеспечить прогнозируемое время захвата вируса, близкое к измеренному значению 122 с (рис. S2A).Наши данные также показывают, что разница между наблюдаемым и прогнозируемым временем захвата не отражает время, необходимое для визуализации ямки с покрытием. Если мы предположим, что большинство обычных везикул, покрытых клатрином, содержат 60 клатриновых трискелионов (соответствующих форме футбольного мяча), пиковая флуоресценция, связанная с такими везикулами, указывает на то, что 7 трискелий достаточны для обнаружения. Среднее время жизни обычного пузырька составляет 50 секунд, что указывает на то, что ямки могут образовываться до 6 секунд, прежде чем мы сможем их визуализировать.Наконец, корректировки предполагаемого следа вируса на плазматической мембране, варьирующиеся от области, контактирующей с одним G-тримером, до всей вирусной частицы, не могут объяснить быстрое поглощение вируса (рис. S2B). Таким образом, корректировка любого из параметров нашего моделирования не позволяет приблизить наблюдаемое время к поглощению вируса. Поэтому мы предполагаем, что VSV индуцирует собственное поглощение клатриновым механизмом. Как именно частицы VSV могут влиять на зарождение ямок, неизвестно. В более ранних исследованиях измеряли время между прикреплением и захватом частиц реовируса [1] и вируса гриппа А [9] покрытыми ямками.Частицы гриппа захватывались в среднем через 190 с, тогда как реовирус оставался на клеточной мембране в течение 280–1500 с до ассоциации с клатрином. Хотя причина разного времени поглощения этих вирусов неизвестна, она может отражать свойства, присущие самим вирусным частицам, или взаимодействие специфических рецепторов во время проникновения.

    Модель клатриновой и актинзависимой интернализации VSV

    Наши данные подтверждают следующую модель проникновения VSV с помощью клатрин-зависимого эндоцитоза (рис. 8B).Взаимодействие вируса с клеточной поверхностью способствует его поглощению клатриновым аппаратом. Клатриновый механизм, по-видимому, зарождается в непосредственной близости или непосредственно под вирусной частицей. Покрытая ямка растет с постоянной скоростью, аналогичной обычной, за исключением того, что фаза роста удлиняется, что, возможно, отражает больший размер вирусного груза. Мы предполагаем, что клатриновая оболочка не может полностью окружить вирусную частицу, по крайней мере частично, потому что вирус служит физическим барьером для закрытия ямки.Это ингибирует включение дополнительных молекул клатрина в оболочку, что приводит к образованию частично покрытой структуры с удлиненной шейкой (рис. 8В). Мы предполагаем, что полимеризация актина облегчает инвагинацию этой частично покрытой ямки за счет создания силы, которая помогает поднять мембрану от везикулы или толкает везикулу внутрь клетки (рис. 8В). Процесс расщепления может осуществляться за счет механохимической активности динамина. Для этого процесса может потребоваться больше динамина, и в соответствии с этой идеей вируссодержащие ямки привлекают большее количество динамина.Затем отделившаяся ямка быстро обнажается, что зависит от ауксилина и похоже на обычные везикулы.

    Параллели с клатрин-зависимым поглощением бактерий

    Наши результаты с VSV также имеют параллели с зависимым от клатрина поглощением L. moncytogenes . В частности, клатрин, динамин, ауксилин и актин рекрутируются во время проникновения обоих патогенов, и полимеризация актина имеет решающее значение для их эндоцитоза, но не для процесса сборки клатрина [11,37].Кроме того, локализация актинового аппарата в местах инвазии Listeria , по-видимому, требует предварительного рекрутирования клатрина и динамина [11]. Природа этой связи между клатриновой и актиновой системами неизвестна, но, возможно, VSV и Listeria также используют сходные механизмы для координации полимеризации актина во время их поглощения [11,37]. Несмотря на эти общие черты, адапторный белок, участвующий во внедрении L. monocytogenes , неясен, поскольку ни AP-1, ни -2, ни -3 не накапливаются [11].Это может отражать различия в использовании рецепторов или различия, присущие образующейся структуре клатрина.

    Наши наблюдения демонстрируют потребность в актиновом аппарате для клатрин-зависимого захвата VSV. Будет важно определить, является ли связывание покрытых ямками с актиновым цитоскелетом общим ответом клеток на присутствие больших структур, покрытых клатрином, или взаимодействие запускается рецептор-специфическим образом. Бактериальные патогены, такие как L.monocytogenes и Staphylococcus aureus индуцируют рекрутирование клатринового аппарата посредством взаимодействия бактериальных поверхностных белков с родственными им клеточными рецепторами [11]. Неизвестно, обладают ли вирусы этой способностью, но известно, что некоторые вирусы, в том числе SV40 [38], полиовирус [39], [40], вирус Коксаки группы B [41] и вирус осповакцины [42], способствуют их собственному поглощению в клатрине. -независимый способ.

    Материалы и методы

    Клетки и вирус

    клеток BSC-1 (ATTC CCL-26) поддерживали в среде DMEM (Invitrogen Corporation; Карлсбад, Калифорния) с добавлением 10% эмбриональной бычьей сыворотки (Tissue Culture Biologicals; Tulare, CA).Клетки, стабильно экспрессирующие σ2-eGFP [1], поддерживали, как указано выше, в отсутствие селективного агента. Рекомбинантный VSV (rVSV) [43] и rVSV eGFP-P [44] амплифицировали в клетках BHK-21 (ATTC) и очищали линейными градиентами 15–45% сахарозы, приготовленными в NTE (10 мМ Трис, pH 7,4, 100 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА). Концентрированные запасы вирусов хранили в PBS, содержащем 10 мМ HEPES (pH 7,4), при -80°C. Рекомбинантный VSV, rVSV-LUC, экспрессирующий люциферазу светлячка, был получен путем вставки кодирующей люциферазу области, фланкированной консервативными последовательностями начала и конца гена VSV между лидером и геном N .Вирус выделяли из кДНК, как описано [43].

    Конъюгация красителя с частицами VSV

    Alexa Fluor 647 (Molecular Probes, Invitrogen Corporation) солюбилизировали в ДМСО в концентрации 10 мг/мл и инкубировали при конечной концентрации 62,5 мкг мл -1 с очищенным VSV (1 мг мл -1 ) в 0,1 М NaHCO. 3 (pH 8,3) на 90 мин. при комнатной температуре. Вирус отделяли от свободного красителя с помощью колонки для гель-фильтрации NAP-5 (GE Healthcare; Великобритания), элюируя PBS, содержащим 10 мМ HEPES (pH 7.4) и хранили при -80°С. Чтобы измерить влияние мечения на инфекционность вируса, эквивалентные количества общего вирусного белка из меченых и немеченых препаратов титровали с помощью анализа бляшек на клетках Vero.

    Трансфекция нуклеиновой кислотой

    Приблизительно 60 000 клеток BSC-1 высевали на покровные стекла (диаметр 25 мм, № 1,5, Electron Microscopy Sciences; Хэтфилд, Пенсильвания) за 16–20 ч до трансфекции указанной плазмидой. Родительские клетки BSC-1 или клетки BSC-1, стабильно экспрессирующие крысиный σ2-адаптин [1], трансфицировали 0.5 мкг плазмиды, кодирующей либо легкую цепь клатрина A1 головного мозга крысы, слитую с открытой рамкой считывания томата с тандемным повтором (tom-LCa, [4]), либо крысиный dynamin2-eGFP (любезный подарок доктора Сандры Шмид; Научно-исследовательский институт Скриппса, Ла-Хойя, Калифорния), или бычий eGFP-ауксилин1 [4], или мышиный кортактин-eGFP (любезный подарок доктора Дэвида Друбина; кафедра молекулярной и клеточной биологии, Калифорнийский университет, Беркли, Калифорния) [45],[ 46], или человеческий arp3-eGFP (любезный подарок доктора Тимоти Митчисона; факультет системной биологии, Гарвардская медицинская школа, Бостон, Массачусетс) [47], или человеческий eGFP-β-актин (pAcGFP1-актин; Clonetech Laboratories, Inc. .; Маунтин-Вью, Калифорния) [25], [48] с использованием FUGENE 6 в соответствии с инструкциями производителя (Roche Diagnostics; Индианаполис, Индиана). Клетки визуализировали через 20–24 ч после трансфекции, как описано ниже.

    Там, где указано, перед получением изображения клетки дважды трансфицировали 200 нМ siRNA SMARTpool, нацеленной на люциферазу светлячка (siGENOME non-target siRNA pool #2; D-001210-02-05; Dharmacon, Чикаго, Иллинойс) или РНК-дуплексом нацеливание μ2-адаптина человека [18] в OPTIMEM (Gibco, Invitrogen Corporation) с использованием олигофектамина (Invitrogen Corporation) в соответствии с инструкциями производителя.Через шесть часов после каждой трансфекции к каждому образцу добавляли DMEM, содержащую 10% FBS, и клетки инкубировали в течение 48 часов при 37°C. Эффективность истощения μ2 оценивали путем воздействия на клетки 50 мкг мл -1 Alexa 568-меченого трансферрина человека (Molecular Probes, Invitrogen Corporation) в течение 5 минут. до добавления вирусных частиц.

    Анализ экспрессии вирусных генов

    Анализы

    люциферазы проводили в 96-луночных планшетах (PerkinElmer), засеянных 8000 клеток на лунку за 16–18 ч до инфицирования.Где указано, клетки обрабатывали миРНК или специфическими химическими ингибиторами. Затем клетки инфицировали rVSV-LUC при MOI 0,5, и вирус удаляли через 1 час. Люминесценцию измеряли через 4–5 ч после инъекций с использованием реагента люциферазы светлячка Steady-Glo (Promega) в соответствии с инструкциями производителя. Значения люминесценции регистрировали на сцинтилляционном счетчике MicroBeta TriLux (PerkinElmer).

    Электронная микроскопия

    клеток BSC-1 на пластиковых покровных стеклах диаметром 25 мм фиксировали, как описано ранее [49].Вкратце, клетки инокулировали 20 мкМ цитоД в среде DMEM, содержащей 10% FBS, или оставляли без обработки на 10 мин. при 37°С. Клетки инокулировали в присутствии или в отсутствие соединения с rVSV при MOI 5000 и инкубировали в течение дополнительных 15 минут. Зараженные клетки фиксировали раствором 1% глутарового альдегида (Electron Microscopy Sciences), 0,5 мг/мл сапонина (Sigma-Aldrich) и 2 мг/мл дубильной кислоты (Mallinckrodt Inc.; Сент-Луис, Миссури) при 37°C в 100 мМ фосфат натрия, 50 мМ KCl, 5 мМ MgCl 2 , рН 7.0 (буфер А) в течение 30 мин. на РТ. Фиксированные клетки дважды промывали буфером А при рН 6,0 и обрабатывали 1% тетраоксидом осмия (OsO4) + 1,5% ферроцианидом калия (KFeCN 6 ) в течение 30 мин. Обработанные образцы промывали водой, окрашивали 1% водным уранилацетатом в течение 30 мин и обезвоживали в спиртах (50%, 70%, 95%, 2×100%) в течение 5 мин. каждый. После обезвоживания излишки спирта промокали фильтровальной бумагой, покровные стекла сразу же покрывали тонким слоем эпона и оставляли полимеризоваться при 60°С на ночь.После полимеризации покровное стекло снимали, а встроенные клетки наклеивали на полимерный блок и делали срезы. Ультратонкие срезы (около 60–80 нм) делали на микротоме Reichert Ultracut-S, снимали на медные сетки, окрашенные уранилацетатом и цитратом свинца. Изображения были получены с использованием просвечивающего электронного микроскопа G2 Spirit Bio Twin (Fei, Hillsboro, OR).

    Визуализация живых клеток

    Клетки на покровных стеклах диаметром 25 мм помещали в перфузионную камеру и покрывали α-MEM без фенолового красного с добавлением 20 мМ HEPES pH 7.4 и 2% ФБС. Камеру помещали в держатель образцов (20/20 Technology Inc.; Уилмингтон, Северная Каролина) при температуре 37°C, а влажность воздуха над ячейками поддерживали при 37°C и 5% CO 2 . Чтобы визуализировать интернализацию вируса, клетки инокулировали Alexa Fluor 647 rVSV или rVSV eGFP-P при MOI около 500 после кратковременного центрифугирования исходного материала вируса для удаления агрегатов. Прямой визуальный осмотр вирусных частиц в поголовье подтвердил отсутствие таких агрегатов и наличие отдельных изолированных вирусных частиц (рис. S1B).Образцы последовательно освещали с интервалами 2–8 с в течение 50–150 мс с использованием ранее описанной конфигурации лазера и конфокального микроскопа [1], [50].

    Анализ изображений и данных

    Проникновение вируса и образование ямок в оболочке анализировали с помощью Slidebook 4.2 (Intelligent Imaging Innovations; Денвер, Колорадо). События полной интернализации вируса определяли по исходному отсутствию адаптера или клатрина с последующей колокализацией белков оболочки с частицей и обнаруживаемым смещением вириона из исходного положения после разборки оболочки.Только события полной интернализации были включены в анализы времени жизни ямок, кинетики рекрутирования белков оболочки и количества белков, определяемых по интенсивности флуоресценции меченых белков. Следующие события были исключены из этих анализов: (1) события, при которых белки оболочки локализовались вместе с вирусом до начала или все еще были связаны в конце замедленной съемки; (2) события, в которых частицы быстро двигались во время колокализации с клатрином (эндосомальные вирионы) или не двигались после его исчезновения; и (3) события, в которых флуоресценция другой клатриновой структуры сталкивается с ямкой, содержащей вирус.Рисунок S3 суммирует относительную частоту всех событий, проанализированных в этом исследовании.

    Обычные покрытые везикулы были идентифицированы и проанализированы на основе ранее определенных пространственных и кинетических параметров [1], [4], [51]. Скорость зарождения ямок с покрытием (рис. 7) и эффективность заполнения ямок в присутствии и отсутствии цитоD и latB (рис. 6C) оценивали с помощью приложения для автоматизированного анализа изображений (IMAB), созданного с помощью MATLAB 7 (Mathworks; Natick, MA). ) [4]. Изображения обрабатывались и анализировались, как описано выше, и все события проверялись вручную.SigmaPlot 8.0 (SYSTAT; Point Richmond, CA) использовали для построения графиков данных и выполнения статистического анализа. Фильмы были созданы с использованием ImageJ (Национальный институт здравоохранения США, Бетесда, Мэриленд; http://rsb.info.nih.gov/ij/).

    Чтобы определить положение частицы во времени, к каждому покадровому изображению вручную применялась маска, охватывающая вирион, и центрировалась по пиковой интенсивности флуоресценции красителя, ассоциированного с вирусом. Координаты X, Y центроида маски использовались для расчета смещения частицы в любой новой позиции (X n , Y n ) относительно начала прикрепления вируса (X 0 , Y 0 ) согласно к уравнению: перемещение = (X n −X 0 )+(Y n −Y 0 ).Скорость смещения частиц оценивали путем построения квадрата среднего смещения в зависимости от времени, а коэффициент диффузии (D) рассчитывали по соотношению: (среднее смещение) 2  = 4Dt.

    Интенсивность флуоресценции белков, ассоциированных с оболочкой, измеряли путем нанесения маски, охватывающей флуоресценцию ямок. Локальный фон вычитали путем измерения флуоресценции, связанной с равным количеством пикселей. Чтобы получить флуоресцентные следы отдельных вирусных событий, значения масштабировали относительно средней максимальной флуоресценции клатрина, наблюдаемой в лунках, лишенных вируса, из тех же клеток.Нормализованные значения были нанесены на график как средневзвешенное значение каждого третьего значения, где 60% применялось к среднему значению и 20% к каждому соседнему значению. Сравнительные графики времени жизни интернализации и кинетики рекрутирования белка были построены следующим образом: (1) интенсивность флуоресценции каждого белка усреднялась во времени для всех ямок, содержащих или не содержащих вирус; (2) средняя максимальная флуоресценция и общее время жизни клатрина в лунках без вируса были установлены равными 100; 3) оба параметра нормированы пропорционально для вируссодержащих ямок; (4) флуоресценцию белка строили через 8 равноотстоящих интервалов +/- стандартная ошибка.

    Оценка площади поверхности везикул

    Площадь поверхности (SA) сферических везикул оценивали по их внутреннему радиусу (r) по уравнению: SA = 4πr 2 , или для вытянутого сфероида с полярным радиусом (c) и экваториальным радиусом ( а) по уравнению: SA = 2πa 2 +2π(ac/e)sin −1 e, где эллиптичность (e) = √1−(a 2 /c 2 ).

    Моделирование захвата вируса методом Монте-Карло

    MATLAB 7 (Mathworks) использовался для моделирования случайного движения частицы VSV на сетке 100×100 точек.Предполагая определенное расстояние между узлами сетки dg (в нм), время (t s ), необходимое для перемещения частицы между точками, оценивалось по формуле t s  = α(dg) 2 /4D, где D — коэффициент диффузии VSV (рис. 7B; 1×10 90 791 −11 90 792 см 90 791 2 90 792 с 90 791 −1 90 792 ), dg — расстояние между двумя соседними точками сетки, а α — поправочный коэффициент, полученный в результате калибровки моделирования. Каждое моделирование выполнялось с шагом 2,5 с.Количество ямок с покрытием на первом этапе оценивали следующим образом: (скорость образования ямок) × (время жизни ямок) × (100×dg) 2 . Количество новых ямок на каждом этапе рассчитывали как (скорость образования ямок)×(ts)×(100×dg) 2 . Используя эти параметры, частице VSV со следом, равным 120×120 нм 2 , позволяли диффундировать по сетке до тех пор, пока она не сталкивалась с ямкой с покрытием, и время, прошедшее между началом моделирования и захватом частицы, регистрировалось для 100 частицы.Средняя скорость зарождения ямок (0,6 событий на 10 90 791 8 90 792 нм 90 791 2 90 792 с 90 791 -1 90 792; всего 703 события) была измерена в присутствии VSV для 6 клеток, экспрессирующих σ2-eGFP. IMAB [4] использовали для идентификации и подсчета всех пятен AP-2, которые появлялись во время визуализации, и исключали те, которые длились менее 2 последовательных временных точек (6–8 с).

    Дополнительная информация

    Рисунок S1.

    Визуализация отдельных частиц VSV. (A) Анализы вирусных бляшек, показывающие влияние конъюгации Alexa Fluor 647 на титр вируса.Очищенные частицы VSV метили с использованием указанных концентраций красителя, как описано в разделе «Материалы и методы», и вирионы подвергали анализу бляшек на клетках Vero после удаления свободных молекул красителя. Титр каждого штамма вируса представлен в бляшкообразующих единицах на мл (БОЕ мл -1 ). (B) Чистая интенсивность флуоресценции частиц VSV, помеченных Alexa Fluor 647. Вирионы на покровном стекле визуализировали с помощью конфокальной флуоресцентной микроскопии, и измеряли интенсивность флуоресценции (условные единицы) каждой частицы за вычетом локального фона.Распределение интенсивности флуоресценции частиц отображается в виде графика гистограммы, на которой красная линия изображает наиболее подходящую кривую Гаусса. На вставке показано репрезентативное изображение вирусных частиц (синий).

    https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1000394.s001

    (1,17 МБ TIF)

    Рисунок S2.

    Параметры, влияющие на смоделированное время захвата VSV клатрином. (A) Влияние изменения коэффициента диффузии VSV (черный) и скорости зарождения ямки с покрытием (серый) на время, прошедшее между началом диффузии вируса и захватом ямки с покрытием.Моделирование Монте-Карло проводилось для 100 частиц VSV с использованием указанных изменений в каждом параметре при сохранении постоянного вирусного следа (dg) 120×120 нм 2 и времени жизни ямки 20 с. Скорость зарождения ямок была установлена ​​равной 0,6 событий/10 8 нм 2 с -1 при изменении коэффициента диффузии, а последний был установлен равным 1×10 -11 см 2 с — 1 при изменении скорости нуклеации. (B) Влияние изменения времени жизни ямки (черный) и размера следа вируса (серый) на время, прошедшее между началом диффузии вируса и захватом ямки с покрытием.Моделирование проводилось так же, как и для панели А.

    .

    https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1000394.s002

    (0,21 МБ TIF)

    Рисунок S3.

    Судьба всех связанных с мембраной частиц VSV, проанализированных в этом исследовании. (A) Судьба вирионов (n = 522 из 28 клеток), уже прикрепленных к поверхности клетки в начале получения изображения. Судьба каждой частицы была классифицирована в соответствии с характером ее связи с клатрином, и отображается описание каждого результата вместе с количеством частиц в каждой категории.Поле представляет собой общую продолжительность репрезентативного покадрового захвата (в диапазоне от 6 до 10 минут), а левая и правая стороны прямоугольника соответствуют первому (началу) и последнему (концу) полученному изображению соответственно. (B) Судьба вирионов (n = 144 из 28 клеток), которые прикрепились к поверхности клетки во время получения изображения. Судьба частиц изображена как в А.

    .

    https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1000394.s003

    (4,94 МБ TIF)

    Видео S1.

    Клатринозависимый захват VSV.Промежуток времени, изображающий интернализацию одиночных вирионов VSV (синий) отдельной клеткой BSC-1 (такой же, как на рисунке 1A), коэкспрессирующей tom-LCa (красный) и σ2-eGFP (зеленый). Часть нижней клеточной поверхности показана как наложение трех каналов, а три примера событий интернализации вируса выделены синими кружками, окружающими вирионы (синий). Частота кадров в этом и всех последующих роликах увеличена в 10 раз по отношению к реальному времени, которое указано в метке времени.

    https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1000394.s004

    (2,45 МБ AVI)

    Видео S4.

    Влияние диназора на интернализацию ВВС. Клетки BSC-1, экспрессирующие tom-LCa (красный) и σ2-eGFP (зеленый), инокулировали частицами VSV (синий), а через 5 мин добавляли диназор до 80 мкМ. На видео показаны две частицы VSV (обведены) в покрытых ямках в начале покадровой съемки, которая началась через 12 минут после добавления dynasore. Обратите внимание, что ни одна из частиц не интернализуется.

    https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1000394.s007

    (4,00 МБ AVI)

    Видео S5.

    Рекрутирование ауксилина-1 во время интернализации VSV. Фильм изображает событие интернализации, показанное на рисунке 4A. Левая панель представляет собой наложение каналов VSV (синий), tom-LCa (красный) и eGFP-auxilin1 (зеленый), а правая панель показывает только флуоресценцию aux1. Положение вириона обозначено кружком на обеих панелях.

    https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1000394.s008

    (6,61 МБ AVI)

    Видео S6.

    Динамика актина при интернализации ВВС. Видео изображает событие, показанное на рисунке 5A. Левая панель представляет собой наложение каналов VSV (синий), tom-LCa (красный) и актин-eGFP (зеленый), а правая панель показывает только актиновую флуоресценцию. Положение вириона обозначено кружком на обеих панелях.

    https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1000394.s009

    (6,01 МБ AVI)

    Видео S7.

    Накопление Arp3 при интернализации ВВС. Левая панель представляет собой наложение каналов VSV (синий), tom-LCa (красный) и arp3-eGFP (зеленый), а правая панель показывает только флуоресценцию arp3 из события интернализации вируса, показанного на рисунке 5C. Положение вириона обозначено кружком на обеих панелях. Обратите внимание на временное увеличение флуоресценции arp3 незадолго до поглощения вирусом.

    https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1000394.s010

    (4,15 МБ AVI)

    Видео S8.

    Накопление кортактина при интернализации ВВС. Левая панель представляет собой наложение каналов VSV (синий), tom-LCa (красный) и кортактин-eGFP (зеленый), а правая панель показывает только флуоресценцию кортактина из события, показанного на рисунке 5E. Положение вириона обозначено кружком на обеих панелях. Обратите внимание на всплеск флуоресценции кортактина незадолго до поглощения вирусом.

    https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1000394.s011

    (8,41 МБ AVI)

    Видео S9.

    Влияние цитохалазина D на интернализацию VSV. Клетки BSC-1, экспрессирующие tom-LCa (красные), обрабатывали 20 мкМ цитохалазина D (cytoD) в течение 10 минут и инокулировали частицами VSV (синие). Замедленные изображения были получены, начиная с 1 минуты после добавления вируса. На видео показан один вирион (обведен кружком), который прикрепляется к поверхности клетки через 15 минут после добавления цитоD и попадает в ямку с покрытием. Показано наложение каналов VSV и LCa.

    https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1000394.s012

    (5,60 МБ AVI)

    Благодарности

    Мы благодарим Марию Эрикссон за профессиональную подготовку ультратонких клеточных срезов, используемых в исследованиях с помощью электронной микроскопии, а также докторов Антуана ван Ойена и доктора Стивена Харрисона за стимулирующие обсуждения.

    Вклад авторов

    Задумал и спроектировал эксперименты: DKC RHM SS TK SPJW. Выполнял опыты: ДКС РХМ СС ТК СПЖВ. Проанализированы данные: DKC RHM SS TK SPJW. Предоставленные реагенты/материалы/инструменты для анализа: DKC RHM SS TK SPJW.Написал статью: DKC TK SPJW.

    Каталожные номера

    1. 1. Эрлих М., Болл В., Ван Ойен А., Харихаран Р., Чандран К. и др. (2004)Эндоцитоз путем случайного инициирования и стабилизации ямок, покрытых клатрином. Ячейка 118: 591–605.
    2. 2. Damke H, Baba T, Warnock DE, Schmid SL (1994) Индукция мутантного динамина специфически блокирует образование пузырьков с эндоцитарным покрытием. J Cell Biol 127: 915–934.
    3. 3. Praefcke GJ, McMahon HT (2004)Суперсемейство динаминов: универсальные мембранные тубуляции и молекулы деления? Nat Rev Mol Cell Biol 5: 133–147.
    4. 4. Massol RH, Boll W, Griffin AM, Kirchhausen T (2006)Всплеск рекрутирования ауксилина определяет начало обнажения покрытых клатрином везикул. Proc Natl Acad Sci U S A 103: 10265–10270.
    5. 5. Lee DW, Wu X, Eisenberg E, Greene LE (2006)Динамика набора GAK и ауксилина в покрытые клатрином ямки во время эндоцитоза. J Cell Sci 119: 3502–3512.
    6. 6. Матлин К.С., Реджио Х., Хелениус А., Саймонс К. (1982)Путь проникновения вируса везикулярного стоматита, ведущий к инфекции.Дж. Мол. Биол. 156: 609–631.
    7. 7. Суперти Ф., Сеганти Л., Руджери Ф.М., Тинари А., Донелли Г. и др. (1987)Путь проникновения вируса везикулярного стоматита в различные клетки-хозяева. J Gen Virol 68 (часть 2): 387–399.
    8. 8. Sun X, Yau VK, Briggs BJ, Whittaker GR (2005)Роль опосредованного клатрином эндоцитоза во время проникновения вируса везикулярного стоматита в клетки-хозяева. Вирусология 338: 53–60.
    9. 9. Rust MJ, Lakadamyali M, Zhang F, Zhuang X (2004) Сборка эндоцитарного механизма вокруг отдельных вирусов гриппа во время проникновения вируса.Nat Struct Mol Biol 11: 567–573.
    10. 10. Macia E, Ehrlich M, Massol R, Boucrot E, Brunner C, et al. (2006) Dynasore, проникающий в клетки ингибитор динамина. Ячейка разработчиков 10: 839–850.
    11. 11. Вейга Э., Гуттман Дж. А., Бонацци М., Букро Э., Толедо-Арана А. и др. (2007)Инвазивные и прикрепляющиеся бактериальные патогены кооптируют клатрин-хозяин для инфекции. Клеточный микроб-хозяин 2: 340–351.
    12. 12. Boucrot E, Saffarian S, Massol R, Kirchhausen T, Ehrlich M (2006)Роль липидов и актина в формировании ямок, покрытых клатрином.Разрешение ячейки опыта 312: 4036–4048.
    13. 13. Sampath P, Pollard TD (1991)Влияние цитохалазина, фаллоидина и pH на удлинение актиновых филаментов. Биохимия 30: 1973–1980.
    14. 14. Coue M, Brenner SL, Spector I, Korn ED (1987) Ингибирование полимеризации актина латрункулином A. FEBS Lett 213: 316–318.
    15. 15. Simpson RW, Hauser RE, Dales S (1969)Виропексис вируса везикулярного стоматита L-клетками. Вирусология 37: 285–290.
    16. 16.Dahlberg JE (1974) Количественный электронно-микроскопический анализ проникновения VSV в L-клетки. Вирусология 58: 250–262.
    17. 17. Мэтлин К.С., Реджио Х., Хелениус А., Саймонс К. (1982)Проникновение оболочечных вирусов в линию эпителиальных клеток. Prog Clin Biol Res 91: 599–611.
    18. 18. Мотли А., Брайт Н.А., Симан М.Н., Робинсон М.С. (2003)Опосредованный клатрином эндоцитоз в клетках с истощенным AP-2. J Cell Biol 162: 909–918.
    19. 19. Хуанг Ф., Хворова А., Маршалл В., Соркин А. (2004) Анализ клатрин-опосредованного эндоцитоза рецептора эпидермального фактора роста с помощью РНК-интерференции.J Biol Chem 279: 16657–16661.
    20. 20. Lakadamyali M, Rust MJ, Zhuang X (2006)Лиганды клатрин-опосредованного эндоцитоза по-разному сортируются в отдельные популяции ранних эндосом. Ячейка 124: 997–1009.
    21. 21. Chen C, Zhuang X (2008)Эпсин 1 представляет собой специфичный для груза адаптер для клатрин-опосредованного эндоцитоза вируса гриппа. Proc Natl Acad Sci U S A 105: 11790–11795.
    22. 22. Johannsdottir HK, Mancini R, Kartenbeck J, Amato L, Helenius A (2009)Факторы и функции клеток-хозяев, участвующие в проникновении вируса везикулярного стоматита.Дж. Вирол 83: 440–453.
    23. 23. Idrissi FZ, Grotsch H, Fernandez-Golbano IM, Presciatto-Baschong C, Riezman H, et al. (2008) Отдельные структуры акто/миозина-I связаны с эндоцитарными профилями на плазматической мембране. J Cell Biol 180: 1219–1232.
    24. 24. Каксонен М., Торет С.П., Друбин Д.Г. (2005) Модульная конструкция для клатрин- и актин-опосредованного эндоцитоза. Ячейка 123: 305–320.
    25. 25. Merrifield CJ, Feldman ME, Wan L, Almers W (2002)Визуализация рекрутирования актина и динамина во время инвагинации одиночных ямок, покрытых клатрином.Nat Cell Biol 4: 691–698.
    26. 26. Merrifield CJ, Qualmann B, Kessels MM, Almers W (2004)Невральный белок синдрома Вискотта-Олдрича (N-WASP) и комплекс Arp2/3 рекрутируются в места клатрин-опосредованного эндоцитоза в культивируемых фибробластах. Eur J Cell Biol 83: 13–18.
    27. 27. Merrifield CJ, Perrais D, Zenisek D (2005)Связь между инвагинацией ямок, покрытых клатрином, рекрутированием кортактина и разрывом мембраны, наблюдаемая в живых клетках. Ячейка 121: 593–606.
    28. 28. Yarar D, Waterman-Storer CM, Schmid SL (2005)Динамический актиновый цитоскелет функционирует на нескольких стадиях клатрин-опосредованного эндоцитоза. Мол Биол Ячейка 16: 964–975.
    29. 29. Каксонен М., Сунь Ю., Друбин Д.Г. (2003)Путь ассоциации рецепторов, адаптеров и актина во время эндоцитарной интернализации. Ячейка 115: 475–487.
    30. 30. Готлиб Т.А., Иванов И.Е., Адесник М., Сабатини Д.Д. (1993) Актиновые микрофиламенты играют критическую роль в эндоцитозе на апикальной, но не на базолатеральной поверхности поляризованных эпителиальных клеток.J Cell Biol 120: 695–710.
    31. 31. МакНивен М.А., Ким Л., Крюгер Э.В., Орт Дж.Д., Цао Х. и др. (2000) Регулируемые взаимодействия между динамином и актин-связывающим белком кортактином модулируют форму клетки. J Cell Biol 151: 187–198.
    32. 32. Уруно Т., Лю Дж., Чжан П., Фань Ю., Эгиле С. и др. (2001)Активация опосредованной комплексом Arp2/3 полимеризации актина кортактином. Nat Cell Biol 3: 259–266.
    33. 33. Qualmann B, Kelly RB (2000)Изоформы синдапина участвуют в рецептор-опосредованном эндоцитозе и организации актина.J Cell Biol 148: 1047–1062.
    34. 34. Kessels MM, Qualmann B (2002)Синдапины интегрируют N-WASP в опосредованный рецептором эндоцитоз. Эмбо J 21: 6083–6094.
    35. 35. Хуссейн Н.К., Дженна С., Глогауэр М., Куинн С.С., Васиак С. и др. (2001) Эндоцитарный белок интерсектин-1 регулирует сборку актина посредством Cdc42 и N-WASP. Nat Cell Biol 3: 927–932.
    36. 36. Хуссейн Н.К., Ямабхай М., Рамджаун А.Р., Гай А.М., Баранес Д. и др. (1999) Варианты сплайсинга интерсектина являются компонентами эндоцитарного механизма в нейронах и ненейрональных клетках.J Biol Chem 274: 15671–15677.
    37. 37. Veiga E, Cossart P (2005) Listeria захватывает клатрин-зависимый эндоцитарный механизм для проникновения в клетки млекопитающих. Nat Cell Biol 7: 894–900.
    38. 38. Pelkmans L, Puntener D, Helenius A (2002)Локальная полимеризация актина и рекрутирование динамина при индуцированной SV40 интернализации кавеол. Наука 296: 535–539.
    39. 39. Бранденбург Б., Ли Л.И., Лакадамьяли М., Руст М.Дж., Чжуан Х и др. (2007) Визуализация проникновения полиовируса в живые клетки.PLoS Биол 5: e183.
    40. 40. Coyne CB, Kim KS, Bergelson JM (2007)Проникновение полиовируса в микрососудистые клетки головного мозга человека требует рецептор-индуцированной активации SHP-2. Эмбо J 26: 4016–4028.
    41. 41. Coyne CB, Bergelson JM (2006)Вирус-индуцированные сигналы киназы Abl и Fyn обеспечивают проникновение вируса Коксаки через плотные соединения эпителия. Ячейка 124: 119–131.
    42. 42. Mercer J, Helenius A (2008) Вирус коровьей оспы использует макропиноцитоз и апоптозную мимикрию для проникновения в клетки-хозяева.Наука 320: 531–535.
    43. 43. Whelan SP, Ball LA, Barr JN, Wertz GT (1995)Эффективное восстановление вируса инфекционного везикулярного стоматита полностью из клонов кДНК. Proc Natl Acad Sci U S A 92: 8388–8392.
    44. 44. Schott DH, Cureton DK, Whelan SP, Hunter CP (2005) Противовирусная роль механизма РНК-интерференции в Caenorhabditis elegans. Proc Natl Acad Sci USA 102: 18420–18424.
    45. 45. Le Clainche C, Pauly BS, Zhang CX, Engqvist-Goldstein AE, Cunningham K, et al.(2007) Комплекс Hip1R-cortactin отрицательно регулирует сборку актина, связанную с эндоцитозом. Эмбо J 26: 1199–1210.
    46. 46. Каксонен М., Пэн Х.Б., Раувала Х. (2000)Ассоциация кортактина с динамическим актином в ламеллоподиях и эндосомальных пузырьках. J Cell Sci 113 Pt 24: 4421–4426.
    47. 47. Welch MD, DePace AH, Verma S, Iwamatsu A, Mitchison TJ (1997)Комплекс Arp2/3 человека состоит из эволюционно законсервированных субъединиц и локализован в клеточных областях динамической сборки актиновых филаментов.J Cell Biol 138: 375–384.
    48. 48. Ballestrem C, Wehrle-Haller B, Imhof BA (1998)Динамика актина в живых клетках млекопитающих. J Cell Sci 111 (Pt 12): 1649–1658.
    49. 49. Maupin P, Pollard TD (1983)Улучшение сохранения и окрашивания актиновых филаментов клеток HeLa, мембран, покрытых клатрином, и других цитоплазматических структур путем фиксации дубильной кислотой-глутаральдегидом-сапонином. J Cell Biol 96: 51–62.
    50. 50. Boucrot E, Kirchhausen T (2008) Клетки млекопитающих изменяют объем во время митоза.ПЛОС ОДИН 3: e1477.
    51. 51. Saffarian S, Kirchhausen T (2008)Дифференциальная нанометрия мимолетности: измерения флуоресценции живых клеток с осевым разрешением 10 нм на плазматической мембране. Биофиз J 94: 2333–2342.

    Последствия синдрома Элерса-Данлоса для полости рта и зубов – The Ehlers-Danlos Support UK

    Стивен Портер, директор и профессор стоматологической медицины, Стоматологический институт Истмана UCL, Лондон

    Обратите внимание: следующий текст не может и не должен заменять рекомендации лечащего врача пациента.Любой человек, который испытывает симптомы или чувствует, что что-то не так, должен обратиться за индивидуальной профессиональной помощью для оценки и/или лечения. Эта информация предназначена только для ознакомления и не предназначена для предоставления индивидуальной медицинской консультации.

    Введение

    Синдромы Элерса-Данлоса (СЭД) приводят к ряду признаков, поражающих полость рта, которые могут снижать качество жизни. Кроме того, рутинная стоматологическая помощь может быть нарушена вследствие некоторых системных особенностей заболевания.В этой статье представлен обзор оральных и стоматологических аспектов EDS.

     

    Орофациальные проявления

    Черты лица и рта при СЭД различаются в зависимости от типа заболевания. Было проведено несколько подробных исследований орофациальных проявлений редких и/или недавно описанных типов СЭД. В целом, чем больше дряблость кожи и слизистых оболочек, тем больше вероятность того, что у кого-то будут орофациальные особенности. Точно так же геморрагические типы чаще других вызывают кровоточивость десен.

    Различные потенциальные орофациальные особенности EDS подробно описаны ниже.

     

    Глаза

    Эпикантические складки: это складки, идущие от спинки носа к верхним векам и создающие впечатление расширенной переносицы. Они, по-видимому, наиболее распространены при классической и кифосколиотической СЭД. Эпикантические складки могут уменьшаться с возрастом или изменяться в сторону увеличения расстояния между глазами, создавая впечатление широко расставленных глаз.

    Другие глазные особенности EDS включают опухшие или выступающие верхние веки, голубые склеры (классический, кифосколиотический и артрохалазический типы), способность выворачивать верхнее веко (признак Мейтенье, классический тип), близорукость (близорукость, классический тип) и косоглазие. (косоглазие, классический тип).У людей с сосудистым СЭД могут быть большие выпуклые глаза из-за отсутствия подкожной клетчатки. Кифосколиотическая ЭДС может привести к обращенным вниз глазным щелям.

     

    Уши

    Может отсутствовать ушные мочки, а ушная раковина может быть твердой (сосудистый тип).

     

    Нос

    Спинка носа может быть расширена или уплощена (классический и кифосколиотический типы), в то время как при сосудистой СЭД нос может казаться суженным или острым.

     

    Кожа лица и внешний вид

    Кожа может быть гиперэластичной (очень эластичной), а на лице и лбу могут быть рубцы «сигаретной бумаги» (классический тип). Лица с сосудистым СЭД имеют отчетливый внешний вид лица с выпученными глазами (см. выше), заостренным носом, тонкими губами и впалыми щеками, иногда собирательно называемыми «акрогенными» чертами лица (пожилой вид). Предполагается, что нижняя челюсть у некоторых пациентов имеет уменьшенный размер. Коричневые пятна (называемые пятнами цвета кофе с молоком) могут наблюдаться на коже шеи при некоторых типах СЭД.

     

    Оральный

    Около 50% лиц с СЭД способны дотронуться языком до кончика носа (признак Горлина) – это особенно вероятно при классической и гипермобильной СЭД. Слизистая оболочка полости рта может быть тонкой, легко рваться и давать язвы во рту (классическая и гипермобильная ЭДС). У людей с этим типом также могут отсутствовать губные и/или язычные уздечки (складки слизистой оболочки, расположенные по средней линии губ и под языком).Вывих нижнечелюстного сустава (височно-нижнечелюстного сустава) является возможным признаком классической и гипермобильной ЭДС и, возможно, некоторых подтипов артрохалазии ЭДС.

    Описан спектр зубных аномалий, особенно при классическом и гипермобильном типах, включая высокие бугорки и глубокие фиссуры премоляров и моляров, укороченные или неправильной формы корни с камнями в пульпе коронок и гипоплазию эмали (недоразвитие) с микроскопические признаки различных дефектов эмали и/или дентина.Дефекты эмали могут предрасполагать к легкой потере ткани коронки (истиранию), и если они приводят к потере кальцификации эмали, это увеличивает риск кариеса. Множественные одонтогенные кератоцисты (которые могут вызывать локальную деструкцию костей челюстей) были описаны при сосудистой СЭД.

    Описана повышенная склонность к заболеваниям десен (гингивит и пародонтит) при EDS периодонта, что потенциально может вызвать раннюю потерю зубов у взрослых.Было также высказано предположение, что заболевание пародонта возникает при классической и сосудистой СЭД.

     

    Значение для ухода за полостью рта

    EDS может ухудшить здоровье полости рта за счет увеличения риска разрушения зубов (кариеса) в результате зубных аномалий — они могут задерживать пищу и зубной налет. Кариес сначала вызывает появление безболезненных белых и затемненных участков коронок, но без лечения вызывает болезненный пульпит («зубная боль» от горячей, холодной и сладкой пищи), а затем отмирание зуба и образование болезненного абсцесса (периапикальный периодонтит).Кроме того, пациенты с некоторыми типами EDS могут иметь повышенную предрасположенность к заболеваниям десен (особенно пародонтиту). Воспаление поверхностных десен (гингивит) вызывает отек и кровоточивость, а также может вызвать легкую кровоточивость десен, неприятный вкус и неприятный запах изо рта (галитоз). Воспаление более глубоких тканей (пародонта) также вызывает неприятный запах изо рта и изменение вкуса, но также может привести к подвижности и миграции зубов и, возможно, к ранней потере зубов. Следует также помнить, что у некоторых пациентов с СЭД десны могут более легко кровоточить из-за основного заболевания соединительной ткани.

    Профилактика кариеса и заболеваний десен имеет решающее значение для всех людей, поскольку это позволяет избежать необходимости комплексного стоматологического лечения и снижает риск потери времени на учебу или работу, который может возникнуть в связи с необходимостью лечения зубов. Кроме того, инвазивные стоматологические процедуры, такие как удаление зубов или комплексное лечение заболеваний пародонта, могут осложняться плохим заживлением ран и, возможно, обильным послеоперационным кровотечением. Таким образом, необходимо, чтобы ВСЕ люди с СЭД придерживались диеты, позволяющей избежать развития кариеса, и поддерживать высокий уровень гигиены полости рта, что снизит риск развития кариеса и заболеваний десен.

     

    Поддержание здоровья полости рта

    Принципы поддержания здоровья полости рта основаны на ограничении потребления сахара в рационе и поддержании хорошего режима гигиены полости рта.

     

    Диетические соображения

    Сахара повышают риск развития кариеса, так как бактерии зубного налета размножаются на них и вырабатывают кислоты, которые могут разрушать зубы и вызывать кариес. Простые меры, которые уменьшают кислотное повреждение зубов:

    • Чтобы избежать чрезмерного употребления сладких продуктов
    • Ешьте сладкие продукты только во время еды (сладкие напитки или закуски между приемами пищи увеличивают частоту кислотного воздействия на зубы)
    • Во избежание липких сладких продуктов (например,грамм. ириски), так как они не могут быть легко удалены при обычном действии во рту или при слюноотделении. Продукты, содержащие заменители сахара, такие как сорбит, не так вредны, как те, которые содержат сахарозу, глюкозу или фруктозу, но заменители сахара могут вызвать у некоторых людей расстройство желудочно-кишечного тракта, так что будьте осторожны!

    Твердые фрукты и овощи плохо удаляют налет с зубов, но содержат меньше сахара, чем сладости и снеки, и поэтому являются альтернативой последним. Точно так же пикантные закуски, не содержащие сахара, например.грамм. арахиса, не причиняют заметного вреда зубам, более того, соленые закуски действительно могут защитить зубы, стимулируя выделение слюны.

    Диета не должна быть скучной. Нет необходимости полностью избегать сахара — при условии, что люди разумны и поддерживают высокий уровень гигиены полости рта (см. ниже), их риск развития кариеса, как правило, будет низким.

     

    Хорошая гигиена полости рта

    Чистка зубов

    Налет необходимо удалять с зубов, иначе бактерии вызовут кариес и заболевания десен.Зубы следует чистить по крайней мере два раза в день, используя подходящую зубную щетку и зубную пасту, содержащую фтор. Щетка должна иметь маленькую головку, которая позволит достичь всех доступных поверхностей зубов. Щетинки не должны быть жесткими, так как это может привести к потере тканей зуба при оголении корней у края десны. Можно использовать различные техники (например, осторожное перекатывание вверх-вниз или движение в виде восьмерки), но важно не чистить зубы в горизонтальном направлении, так как это увеличивает риск повреждения десен и любого оголенного корня. поверхности.Чистка должна включать легкий массаж края десны, так как это поможет удалить любой налет, оставшийся под этим участком. EDS вряд ли окажет какое-либо существенное влияние на чистку зубов.

     

    Очистка межзубных промежутков

    Зубные щетки

    удаляют налет и остатки только с верхних и открытых (гладких) поверхностей зубов, поэтому области между зубами (межзубные промежутки) требуют отдельной чистки. Доступны различные межзубные приспособления, в частности зубная нить, межзубные ершики и межзубные палочки.Нитью нужно пользоваться осторожно, чтобы не травмировать десны, но нитью следует щелкать ниже края десны, чтобы удалить любой налет, который всегда скапливается в этом месте. Щетки и палочки следует использовать осторожно, чтобы не повредить десны — их никогда нельзя засовывать между зубами, действительно, палочки лучше всего использовать, когда между зубами есть очевидные промежутки. Держатели флосса могут помочь в использовании зубной нити, особенно если у людей есть трудности с доступом к задним зубам. EDS вряд ли окажет какое-либо существенное влияние на чистку межзубных промежутков, кроме предотвращения травм.

     

    Фториды

    Фтор укрепляет поверхность эмали зубов и снижает риск кариеса. У детей, живущих в географическом регионе, где содержание фтора в воде естественным или искусственным образом составляет одну часть на миллион, эмаль будет иметь повышенную прочность и большую устойчивость к кариесу. Фтор, содержащийся в зубных пастах и ​​ополаскивателях для рта, снижает устойчивость к разрушению только поверхностного слоя эмали.Без сомнения, фториды приносят пользу и рекомендуются всем людям с СЭД. Таким образом, рекомендуется два раза в день использовать фторсодержащую зубную пасту. Фторсодержащие жидкости для полоскания рта также могут быть полезны, хотя, вероятно, не требуются, если пациент уже использует фторированную зубную пасту. Таблетки фтора не приносят значительной пользы взрослым (поскольку зубы уже сформировались), но могут быть полезны детям, живущим в регионах, где вода не фторируется.

     

    Противомикробные жидкости для полоскания рта

    Противомикробные жидкости для полоскания рта могут снизить риск развития гингивита и пародонтита, а также уменьшить неприятный запах изо рта.Доступен широкий ассортимент ополаскивателей для рта; их следует использовать ежедневно. Жидкости для полоскания рта на основе хлоргексидина вызывают поверхностное окрашивание зубов, хотя это можно уменьшить, используя их сразу после чистки зубов, а пятно можно удалить с помощью профессиональной чистки стоматологом, гигиенистом или терапевтом. Нет убедительных доказательств того, что спиртосодержащие жидкости для полоскания рта повышают риск развития рака ротовой полости.

     

    Регулярное посещение стоматолога

    Стоматологи играют важную роль в выявлении и лечении распространенных стоматологических заболеваний.Кроме того, они смогут организовать направление к соответствующим специалистам, если у пациента есть сложное заболевание или возможные проявления СЭД в полости рта, требующие дальнейшего обследования или лечения. Всем пациентам рекомендуется посещать стоматолога раз в полгода. Хотя были опубликованы опасения, что не все люди имеют свободный доступ к стоматологу NHS, вполне вероятно, что это улучшится в результате недавних инициатив NHS. Члены EDS UK, столкнувшиеся с трудностями при получении стоматологической помощи, должны обратиться к автору за советом, как решить эту проблему.

     

    Рекомендации по различным проблемам полости рта

    Удаление зубов

    Есть две проблемы, связанные с удалением зубов у пациентов с СЭД: риск эндокардита и чрезмерное кровотечение после удаления.

     

    Риск эндокардита

    При удалении зубов бактерии из десен попадают в кровоток. У пациентов с аномалиями клапанов сердца существует риск того, что бактерии прикрепятся к клапану (клапанам) и вызовут воспаление (эндокардит), которое может повлиять на функцию сердца, а также вызвать системное заболевание.Ранее сообщалось, что всем пациентам с пороками клапанов перед удалением зубов необходимо назначение антибиотиков для предотвращения возможного эндокардита; однако Национальный институт клинического мастерства (NICE) в настоящее время пришел к выводу, что риск эндокардита после удаления зубов у подавляющего большинства пациентов с известным заболеванием сердечного клапана низок и что антибиотики (антибиотикопрофилактика) не показаны. Тем не менее не все кардиологи согласны с этой рекомендацией. Таким образом, для стоматолога было бы разумным связаться с кардиологом пациента, чтобы определить, желает ли он/она, чтобы ему/ей были назначены антибиотики при любом запланированном удалении зубов.Если стоматолог не желает назначать антибиотики, специалист, если желает, чтобы они были предоставлены, вместо этого назначит их и будет нести юридическую ответственность за любые неблагоприятные последствия (что очень маловероятно).

     

    Кровотечение после удаления

    Пациенты с геморрагическими типами EDS могут быть склонны к обильному кровотечению после удаления. Однако в подавляющем большинстве случаев этого не произойдет, поскольку стоматолог поместит кровоостанавливающее средство в лунку, тщательно зашьет десну и, возможно, даст ополаскиватель для рта, предотвращающий разрушение сгустка (транексамовая кислота).

    Были отдельные сообщения о том, что эффективность местных анестетиков может быть снижена при СЭД. Если это происходит (что случается редко), пациенты должны быть направлены к специалисту в области челюстно-лицевой хирургии, который сможет убедиться, что используется подходящая техника или агент, обеспечивающий эффективную анестезию.

    Существует мало доказательств того, что заживление экстракционных лунок значительно ухудшается у пациентов с СЭД. Если заживление кажется ненормальным (например, постоянная боль, отек, неприятный вкус), пациента следует направить к специалисту по челюстно-лицевой хирургии, который очистит область и, возможно, назначит антибиотики.

     

    Заболевания десен (гингивит и пародонтит)

    Как обсуждалось выше, некоторые типы EDS повышают риск пародонтита. Кроме того, люди с СЭД, как и любой другой человек, подвержены риску некоторых заболеваний пародонта, которые в конечном итоге могут привести к неприятному запаху изо рта, кровоточивости десен, подвижности зубов или их потере. Хорошая гигиена полости рта снизит риск заболеваний пародонта. Кроме того, лица с заболеваниями пародонта должны лечиться у специалиста-пародонтолога, который сможет обеспечить профессиональную чистку зубов и десен, а при показаниях – операцию по улучшению состояния десен.Ранее рекомендовалось, чтобы глубокая очистка десен (удаление накипи) требовала антибиотикопрофилактики, но, как и в случае удаления зубов (см. выше), это может быть уже не так.

     

    Стоматологические реставрации (пломбы, коронки и мостовидные протезы (иногда называемые несъемным протезированием))

    Особых опасений по поводу несъемного протезирования у пациентов с любым типом EDS нет. Большие пломбы или коронки, расположенные ниже края десны, вряд ли вызовут сильное кровотечение, а если оно и возникнет, то, скорее всего, остановится при местном надавливании.

     

    Зубные протезы (съемные протезы)

    Особых опасений по съемному протезированию у пациентов с любым типом EDS нет. Тем не менее, поскольку некоторые пациенты с СЭД более склонны к развитию язв во рту из-за травмы от незакрепленного протеза, очень важно, чтобы протезы были хорошо подогнаны и регулярно осматривались стоматологом.

     

    Эндодонтия (лечение корневых каналов)

    Лечение корневых каналов требуется при отмирании зуба (обычно в результате кариеса) или при образовании абсцесса у основания корня.Эндондонтическое лечение требует, чтобы корневой канал был очищен и заполнен (обычно) гуттаперчей. При ЭДС эндодонтия может осложняться наличием пульповых камней и/или корней, имеющих необычную форму. В таких случаях эндодонтическое лечение лучше всего проводить у соответствующего специалиста (эндодонтиста). Антибиотикопрофилактика, как правило, не требуется при эндодонтическом лечении.

     

    Зубные имплантаты

    Зубные имплантаты представляют собой титановые винты, которые вживляются в кость.Затем на имплантаты можно прикрепить коронки, мосты и зубные протезы. Нет подробных отчетов об использовании зубных имплантатов у пациентов с СЭД, но ожидается небольшое количество неблагоприятных побочных эффектов. Поскольку установка имплантата является хирургической процедурой, применяются те же соображения антибиотикопрофилактики и послеоперационного кровотечения, что и при удалении зубов.

     

    Ортодонтия

    Ортодонтия не противопоказана пациентам с СЭД; однако лечение, возможно, придется изменить, поскольку у некоторых пациентов зубы мигрируют быстрее, чем можно было бы ожидать.После того, как зубы заняли правильное положение, пациенту может потребоваться носить приспособление в течение многих месяцев, чтобы гарантировать, что зубы останутся на своем месте. У некоторых пациентов с EDS могут развиться язвы во рту из-за травмы любого ортодонтического аппарата. Это можно уменьшить, нанеся на скобу защитный воск и, возможно, окклюзионную пасту, наложенную на любые участки изъязвления.

     

    Язвы во рту

    У пациентов с СЭД могут появиться язвы во рту в результате травмы зубов или зубных протезов.Этого лучше всего избежать, убедившись, что зубные протезы хорошо подходят. При появлении язв можно использовать защитную окклюзионную пасту. Следует подчеркнуть, что любой пациент, независимо от его типа ЭДС, с персистирующими или рецидивирующими язвами во рту должен быть направлен к соответствующему специалисту (обычно специалисту в области оральной медицины).

     

    Болезнь височно-нижнечелюстного сустава

    Рецидивирующий вывих височно-нижнечелюстного сустава (ВНЧС) может, в очень редких случаях, требовать хирургического лечения.Это всегда требует консультации челюстно-лицевого хирурга.

     

    Заключение

    Синдромы Элерса-Данлоса могут оказывать значительное влияние на здоровье полости рта и функцию рта; однако большинство пациентов, вероятно, будут подвержены только обычным заболеваниям зубов и десен. Стоматология вряд ли будет сильно скомпрометирована EDS, и, аналогично, у пациентов вряд ли возникнут серьезные осложнения в результате рутинного ухода за полостью рта.Безусловно, пациенты со сложными потребностями полости рта должны находиться под наблюдением соответствующих клиницистов, таких как специалисты в области специальной стоматологии, оральной медицины и челюстно-лицевой хирургии.

    Экспертная оценка: д-р Ханади Казказ, консультант-ревматолог, Больница Университетского колледжа Лондона

    Дата последней проверки: 04.01.2016

    Детская зубная паста с фтором Hello Oral Care, одобренная ADA, не содержит SLS, голубая малина, 4,2 унции (1 шт. в упаковке)

    Я аутист, и мне очень долго не удавалось чистить зубы, потому что для меня это сенсорный ад.

    После того, как я сломал зуб, я решил, что мне нужно более серьезно относиться к гигиене полости рта. Но для этого мне нужно было решить, что мешало мне чистить зубы.

    Шероховатость щетинок (даже на мягких щетках), резкий вкус и слизистая текстура зубной пасты были для меня главными проблемами, а также некоторые проблемы с моим рвотным рефлексом.

    Я был очень рад узнать, что существует зубная паста с голубой малиной! Это мой любимый вкус конфет, поэтому я был очень взволнован, чтобы попробовать это.

    На вкус он действительно похож на голубую малину, но не слишком крепкий и не слишком сладкий! Это правильный вкус и консистенция, чтобы сделать чистку зубов приятной, но при этом у меня не возникло бы искушения потреблять большое количество (на самом деле я бы не стал этого делать, но зубная паста в целом имеет отношение к «запрещенным продуктам», и это может быть забота о ребенке).

    Текстура мягкая и легкая, с очень тонкой зернистостью, что делает ее очень терпимой. Равномерно ложится на зубы, не становясь слизистой или липкой.Меня совсем не заткнуло от текстуры.

    При использовании с очень мягкой щеткой с маленькой головкой это полностью меняет правила игры, и я действительно с нетерпением жду момента, когда смогу почистить зубы!

    Если кто-то считает, что ему нужно «разрешение» на использование этой зубной пасты только потому, что она предназначена для детской зубной пасты, это ваш знак. Вам не нужно продолжать страдать только потому, что вы чувствуете, что во взрослом возрасте от вас ожидают использования жесткой мятной зубной пасты.

    Примечание: если вы взрослый, я рекомендую сообщить своему стоматологу, что вы используете эту щетку, особенно если вы также используете дополнительную мягкую щетку.Мой стоматолог сказал мне, что можно использовать дополнительную мягкую щетку, но мне нужно будет чаще чистить зубы, потому что это не так тщательно.

    Ацикловир для лечения первичного герпетического гингивостоматита

    Herpes simplex labialis (HSL), также известный как герпес, является распространенным заболеванием губ, вызываемым вирусом простого герпеса, которое встречается во всем мире. Он проявляется в виде болезненных везикулярных высыпаний, образующих неприглядные корки, которые вызывают косметические уродства и психосоциальные расстройства.Лекарства не существует, и оно периодически повторяется. Цели: Оценить эффекты вмешательств по профилактике HSL у людей всех возрастов. Методы поиска: Мы провели поиск в следующих базах данных до 19 мая 2015 г.: Специализированный регистр Кокрановской группы по уходу за кожей, Специализированный регистр группы здоровья полости рта, CENTRAL в Кокрановской библиотеке (выпуск 4, 2015 г.), MEDLINE (с 1946 г.), EMBASE (с 1974 г.), LILACS. (с 1982 г.), база данных Китайской национальной инфраструктуры знаний (CNKI), библиотека Airiti и 5 реестров испытаний.Чтобы найти дополнительные ссылки на соответствующие рандомизированные контролируемые испытания, мы просмотрели библиографии включенных исследований и опубликованных обзоров, а также связались с первоначальными исследователями наших включенных исследований. Критерий отбора: Рандомизированные контролируемые испытания (РКИ) вмешательств по предотвращению HSL у иммунокомпетентных людей. Сбор и анализ данных: Два автора независимо друг от друга отобрали испытания, извлекли данные и оценили риск систематической ошибки. Третий автор был доступен для разрешения разногласий во мнениях.Основные результаты: Этот обзор включал 32 РКИ с участием 2640 иммунокомпетентных участников, охватывающих 19 видов лечения. Качество совокупности доказательств было от низкого до среднего для большинства исходов, но было очень низким для нескольких исходов. Нашими первичными результатами были «Заболеваемость ВСЛ» и «Побочные эффекты во время использования профилактического вмешательства». Доказательства краткосрочного (≤ 1 месяца) перорального применения ацикловира для предотвращения рецидива ВСЛ были непоследовательными в зависимости от доз, используемых в исследованиях: В 2 РКИ были представлены доказательства низкого качества в отношении снижения частоты рецидивов ГЛС при применении ацикловира в дозе 400 мг два раза в сутки (отношение рисков (ОР) 0.26, 95% доверительный интервал (ДИ) от 0,13 до 0,51; n = 177), в то время как 1 РКИ, в котором тестировался ацикловир в дозе 800 мг два раза в день, и 2 РКИ, в которых тестировался 200 мг 5 раз в день, не выявили аналогичных профилактических эффектов (ОР 1,08, 95% ДИ от 0,62 до 1,87; n = 237; доказательства среднего качества и ОР 0,46, 95% ДИ от 0,20 до 1,07; n = 66; доказательства низкого качества соответственно). Направление эффекта вмешательства не было связано с риском систематической ошибки. Доказательства 1 РКИ в отношении влияния краткосрочного применения валацикловира на снижение частоты рецидивов ЛГЛ по данным клинической оценки были неопределенными (ОР 0.55, 95% ДИ от 0,23 до 1,28; п = 125; доказательства среднего качества), как и данные 1 РКИ, посвященного краткосрочному применению фамцикловира. В 1 РКИ были получены доказательства низкого качества о том, что длительное применение перорального ацикловира снижает частоту клинических рецидивов (1,80 против 0,85 эпизодов на участника за 4-месячный период, P = 0,009) и вирусологических рецидивов (1,40 против 0,40 эпизодов на участника за 4 месяца). -месячный период, P = 0,003).В одном РКИ было установлено, что длительное применение валацикловира эффективно снижает частоту развития гипергидроза (снижение на 0,09 эпизода на участника в месяц; n = 95). Одно РКИ показало, что длительная супрессивная схема валацикловира приводила к более низкой частоте HSL, чем эпизодическая схема валцикловира (разница в средних значениях (РС) -0,10 эпизодов на участника в месяц, 95% ДИ от -0,16 до -0,05; n = 120). В этих испытаниях не было обнаружено увеличения частоты нежелательных явлений, связанных с применением пероральных противовирусных препаратов (доказательства среднего качества).Не было никаких доказательств того, что краткосрочное использование местных противовирусных препаратов предотвращает рецидив герпеса. В 2 РКИ были получены доказательства среднего качества, что местное применение 5% крема ацикловира, вероятно, оказывает незначительное влияние на предотвращение рецидива ЛГЛ (объединенный ОР 0,91, 95% ДИ от 0,48 до 1,72; n = 271). В одном РКИ были получены доказательства среднего качества о том, что 3% крем фоскарнета для местного применения оказывает незначительное влияние на профилактику HSL (ОР 1,08, 95% ДИ от 0,82 до 1,40; n = 295). Эффективность длительного местного применения крема ацикловира была неопределенной. .В одном РКИ было обнаружено значительно меньше диагностированных в ходе исследований рецидивов HSL при лечении ацикловиром в виде крема, чем при применении плацебо (P <0,05), но не было обнаружено существенных различий в среднем количестве рецидивов, о которых сообщали участники, между двумя группами (P ≥ 0,05). В одном РКИ не было обнаружено профилактического эффекта от местного применения геля 1,5-пентандиола в течение 26 недель (P > 0,05). Другое РКИ показало, что у группы, которая использовала 20% гель 2-гидроксипропил-β-циклодекстрина в течение 6 месяцев, было значительно больше рецидивов, чем у группы плацебо (P = 0.003). В этих исследованиях не было обнаружено увеличения частоты нежелательных явлений, связанных с применением местных противовирусных средств. В двух РКИ было обнаружено, что применение солнцезащитного крема значительно предотвращает рецидивы ВСЛ, вызванные экспериментальным ультрафиолетовым светом (объединенный ОР 0,07, 95% ДИ от 0,01 до 0,33; n = 111), но другое РКИ показало, что солнцезащитный крем не предотвращает HSL, вызванный солнечным светом (ОР 1,13, 95% ДИ от 0,25 до 5,06; n = 51). В этих РКИ не сообщалось о нежелательных явлениях. Было очень мало данных, указывающих на то, что тимопентин, низкоинтенсивная лазерная терапия и гипнотерапия эффективны в предотвращении рецидивов ВСЛ, по одному-два РКИ для каждого вмешательства.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.